Как нарисовать скамейку поэтапно карандашом: Как нарисовать скамейку карандашом поэтапно

Зная, как нарисовать скамейку, человек может не только создавать красивые картины, но и делать чертежи. Этот навык может пригодится в будущем, но для такого мастерства просто необходимы знания построения геометрических фигур в пространстве в разных ракурсах. Здесь главное – не исказить линию, а рисовать вдаль, что удается далеко не каждому.

Нужно повторить курс геометрии и вспомнить основы рисования разных четырехугольников на плоскости и в пространстве. Это во многом поможет начинающему художнику, ведь зная основы и имея воображения, можно создать рисунок любой сложности. Кроме того, можно взглянуть на фото разных лавок и скамеек. Все они сделаны из доски или комплекта для сидения и спинки. Чем больше планок, тем интереснее изделие.

Работа карандашом

Как нарисовать скамейку карандашом, чтобы работа могла стать чертежом знаю не все. Здесь нет ничего сложного, ведь нужно просто следовать правилам создания объемных геометрических фигур. Итак, на листе будет изображена широкая скамья с ручками. Для упрощения восприятия, ее можно представить в виде гексаэдра или вытянутого куба.

В верхней части из одной линии делаем две. Это будет верхняя планка спинки. По бокам плоскости на заднем плане также оформляем еще две вертикальные планки. Посередине между верхней горизонтальной и нижней плоскостями по аналогии рисуем только две видимые стороны параллелограмма. Это граница лавки. От передних ее углов опускаем ножки, а вверх поднимаем на небольшую высоту планки, удерживающие поручни. Параллельно левой и правой сторонам параллелограмма дорисовываем еще две планки, плавно загибая ручку вниз.

Пришел черед горизонтальным планкам лавки, которые рисуем на небольшом расстоянии друг от друга.

То же самое проделываем со спинкой, но в вертикальном порядке.

Добавляем две перемычки по бокам внизу и треугольное соединение лавки с передней ножкой.

Наводим все границы.

Вытираем вспомогательные линии.

Пошаговая инструкция

Наступил черед узнать, как нарисовать скамейку поэтапно. Эту будет изделие, развернутое в противоположную сторону. Изменим траекторию рисунка. Начинаем с параллелограмма (лавка), а теперь дорисуем две плоскости вертикально.

За лавкой с двух сторон выпускаем две планки, которые будут держать спинку. Не забываем их делать объемными. Навешиваем на них округленный параллелограмм, который справа нужно вытянуть вглубь.

Дорисовываем внизу по две кривых ножки, которые соединены между собой круглой перемычкой.

Осталось эффектно разукрасить рисунок. В центральной части делаем светлый блик, а ближе к краям нужно закрасить более темным оттенком коричневого цвета.

Другой вариант простой скамьи

Если же предыдущий вариант не очень получился, можно попробовать разобрать другую методику. Итак, как нарисовать скамейку для начинающих. Начинаем с плоскости спинки, которая висит в виде прямоугольника со круглыми углами и неровными сторонами.

Добавляем объем спинке слева. А снизу выпускаем для планки.

Перед ними рисуем параллелограмм, который лежит на плоскости, а на передний план добавляем ему объем.

Затем нужно дорисовать по две ножки. Которые соединены между собой планкой.

Не задумываясь над светотенью, просто разукрашиваем лавку в один из оттенков синего или серого цвета.

Вариант для малышей

Один из самых простых вариантов – нарисовать скамейку сбоку.

Теперь нужно продлить вглубь рисунка плоскость спинки и лавки. Каждая из них будет иметь форму параллелограмма. Между собой они соединяются одной общей стороной. Получается, как раскрытая длинная тетрадка.

Для спинки дорисовываем нижнюю границу доски, добавляя по линии для стоек. А лавке добавляем четыре ножки, рисуя в прямоугольнике еще одну вертикальную линию.

Чтобы композиция выглядела как законченный рисунок, следует на заднем плане дорисовать границу холма в виде травы. Возле скамьи разбросать отдельные травинки.

Нарисовать скамейку карандашом можно очень просто и быстро. Обязательно пользоваться линейкой чтобы линии получились ровными. Рисовать будем в несколько шагов.

Для начала нарисуем линии как показано на рисунке:

Теперь обрисовываем саму скамейку следующим образом:

Более детально рисуем спинку, ножки, перила:

Добавляем на скамейку доски и узоры на перила:

Дорисовываем черным карандашом/фломастером гвоздики на досках и обводим железные перила:

По желанию разукрашиваем получившийся рисунок.

Предлагают нарисовать вот такой, очень простой рисунок скамейки.

Первым делом рисуем карандашом контуры ножек и сидения, просто в форме вытянутой буквы П.

«Отодвигаем» перспективу дальнего края сидения а торцевые стенки делаем немного под углом к горизонтальным линиям.

Добавляем под сиденье дополнительную перекладину –

Так же, проведя перспективные линии, рисуем задние ножки. Делаем дополнительными линиями объем ножек и сидения.

Прорисовываем текстуру древесных волокон в произвольном порядке.

Здесь представлен именно поэтапный рисунок скамейки карандашом. Но можно и раскрасить его как вам будет угодно.

Перед тем как рисовать скамейку надо прочертить или от руки провести вспомогательные линии. Должна получиться такая фигура и у вас на первом этапе.

Следом рисуем верхнюю и нижнюю планки, а так же ножки и подлокотники.

Теперь на небольшом расстоянии друга от друга нарисуем дощечки лавки.

Спинку скамейки делаем из вертикальных планок на нашем рисунке.

Добавляем перемычки внизу и несколько треугольных соединений.

Детализируем рисунок и смотрим какие линии из вспомогательных остались у нас лишними. Их необходимо будет стереть. Можно добавить теней от скамейки для объемности.

Рисунок скамейки нашей готов!

Давайте вместе попробуем нарисовать скамейку.

Навык рисования скамейки может нам пригодиться для создания более масштабной композиции, для картины с изображением улицы или парка.

Начнем рисовать скамейку с основания – сиденья и нарисуем боковые плоскости толщины скамейки под углом и верхнюю плоскость, учитывая законы перспективы и помня, что параллельные линии в перспективе удаляясь, приближаются друг к другу.

Далее рисуем две опоры для спинки и саму спинку, все детали прорисовываем с толщиной, объемными.

Затем нарисуем ножки и перекладины ножек и тоже на ножках показываем по две грани.

Остается только раскрасить скамейку, стараясь передать свет и тень с помощью более светлых и темных оттенков коричневого.

Чтобы нарисовать скамейку, нужно сначала выстроить линии. Линии должны идти параллельно друг другу, если скамейку вы рисуете прямо, и уходить в перспективу, если вы будете рисовать скамейку боком. В основном она состоит из этих линий. Сидение скамейки из досок, и спинка тоже. Единственное что нужно прорисовать ножки и боковые ручки скамейки. Здесь уже можно сделать какие-то витиеватые узоры. После того как вы всё наметили, стоит прорисовать всё чётко уже карандашом и наметить участки, где падает тень. Так скамейка будет казаться объёмнее. По желанию нашу скамейку можно раскрасить красками. Ниже вы сможете посмотреть, как самим нарисовать скамейку поэтапно.

Сегодня мы с Вами рисуем скамейку. Напомню, что лавочку карандашом мы рисовали здесь.

Как всегда основополагающим в рисовании является Ваше желание! Ну и возьмем еще карандаш и бумагу с ластиком.

Скамейка будет стоять к нам боком. Рисуя с натуры мы измеряем угол отклонения прямых от горизонтали карандашом на вытянутой руке. Таким же образом измеряем угол наклона спинки скамейки.

Намечаем поручни и ножки дугами. Ножки скамейки упираются в углы параллельного прямоугольника (параллельного остованию скамейки), смещенного вперед и вправо.
Размечаем деревянные дощечки.

Прорисуем толщину дощечек, поручней с ножками и обозначим просветы между рейками.

Слегка заштриховываем основание и спинку скамейки, а также металлические поручни. В местах соединения двух металлических дуг тень намного гуще, чем на остальной поверхности. А верхние грани поручней оставляем светлыми, так как на нах падает свет.

Ну давайте оживим наш рисунок, например, лежащим под скамейкой цветным мячом. Не забудьте добавить на нем падающую от скамейки тень и блик.

Как нарисовать зонтик карандашом? Поэтапный урок для начинающих

Сегодня мы узнаем как нарисовать зонтик простым карандашом. Этот аксессуар знаком всем, так как каждый человек имеет его у себя в запасе к дождливому дню. Формы и размеры зонта разнообразны, так же как цвет и рисунки на его поверхности. Но учиться мы будем отталкиваясь от стандартного размера зонта. Его округлая форма – это основа, от которой создается любой дизайн зонта, и данный урок поможет нам ответить на вопрос: «как нарисовать зонтик карандашом поэтапно?».

Инструменты и материалы:

1. Лист белой бумаги.
2. Два простых карандаша: твердый и мягкий. (твердый пригодится для построения, а мягкий – для теней и контраста).
3. Ластик.

Этапы работы:

Фото 1. Простым карандашом проводим наклонную линию, конец которой будет отведен влево. Эта линия послужит центром для зонта и ручкой. От нее сверху отступаем влево и вправо одинаковое расстояние, и чертим вторую линию. Вокруг нее обводим эллипс – вытянутая форма овала. Сверху овала делаем засечку, чтоб определить верхушку зонта:

Фото 2. Сверху эллипса определим верхнюю часть зонта и соединяем их. Сверху на середине добавим острую верхушку:

Фото 3. Переходим к разделению зонта на отсеки. Начнем с верхушки. Разделим их на три части. Середина будет отличаться от боковых сторон тем, что её размер будет немного уменьшен в ширине, а верхняя линия выгнута с вниз. Если сравнивать высоту, то середина будет выше. Следуя законам перспективы:

Фото 4. Теперь делим внутреннюю часть. Изобразим разделения изогнутыми линиями – вверх. Боковые части будут иметь наименьший размер:

Фото 5. Далее прорисуем разделяющие линии. К верху они будут сходиться к центральной линии, или иначе говоря – к ручке. От ее верхней части в стороны проведем горизонтальные линии, которые будут удерживать всю конструкцию раскрытого зонта:

Фото 7. Продолжаем штриховать внутреннюю часть. Пока по тону верх и низ будут совпадать, но позже внутри нужно сделать тень темнее:

Фото 8. Сделаем утолщение на ручке и добавим внизу полосы:

Фото 9. От зонта будет падать тень. Источник света находится справа, поэтому тень будет располагаться слева:

Фото 10. Мягким карандашом добавим контраст и аккуратно, стараемся не перетемнить, проводим контуры. Работа завершена:

Вот мы и научились рисовать зонт поэтапно с помощью простого карандаша. Оказывается,  это совсем не сложно

Как нарисовать звезду карандашом поэтапно: мастер-класс для детей

Многие знают, как нарисовать звезду, однако не у всех этот рисунок может получиться ровно. С помощью подробного и простого описания рисунок получится быстро и ровно. Осталось только вооружиться простым карандашом, линейкой и ластиком.

Рисунок с помощью окружности

1. На листе нужно нарисовать круг. Сделать это можно с помощью циркуля, от руки или обвести что-то круглое, например, стакан. На карандаш лучше сильно не давить, потому что потом круг нужно будет стереть;
2. сначала круг делится на четыре части едва заметными линиями, затем отрезками пожирнее можно поделить его на 5 частей;
3. теперь от каждой точки соприкосновения отрезка и круга нужно провести линию так, чтобы начала образовываться звезда;
4. после этого можно удалить и окружность, и все вспомогательные линии. Звезда готова.

Также вы можете использовать и другие схемы для рисования, готовые примеры есть здесь https://mastersamodelok.ru/kak-narisovat-zvezdu/.

Рисунок с помощью линейки

Для создания следующего рисунка линейна точно понадобится. Лучше взять недлинную, чтобы чертить по ней было удобнее. Этапы для рисования:

• 1.для начала нужно нарисовать пятиугольник, где верхушка будет острой. Он быть расположен так, чтобы потом из него можно было дорисовать звезду;
• от точек пятиугольника нужно нарисовать к противоположной точке прямую линию, прочертив это от всех 5 вершин;
• так должна получиться звезда, вспомогательные лишние линии нужно стереть.

Рисунок объемной звезды

Можно нарисовать обычную звезду, но с помощью правильного раскрашивания придать ей объем. Сделать это можно с помощью обычной линейки и того же круглого предмета.

Этапы работы:

1. на листке бумаги нужно нарисовать круг;
2. эту окружность нужно так же поделить на пять одинаковых частей, нарисовав точки;
3. затем эти точки нужно соединить линиями, чтобы получилась пятиконечная звезда;
4. для того, чтобы она стала объемной, из каждого угла в середине нужно провести прямую линию. Все эти линии должны встретиться в одной точке по центру;
5. теперь звезде нужно придать объем с помощью закрашивания одной из сторон луча. Делать это нужно с одной и той же стороны в каждой конечности. Теперь фигура получила объем благодаря такому хитрому приему.

Звезда без рисования окружности

С подобным пошаговым мастер-классом можно нарисовать простую пятиконечную звезду. Этапы:

1. первым делом нужно нарисовать прямую линию по вертикали – это будет основа для будущего рисунка;
2. теперь от этой вертикальной линии нужно нарисовать под углом еще два отрезка, чтобы они образовывали луч. Получается угол, который первая нарисованная линия должна делать пополам;
3. отступив чуть от вершины, примерно на том уровне, где должны быть боковые лучи, нужно нарисовать две прямые линии, одну на некотором расстоянии от другой;
4. теперь от верхнего луча по сторонам на основе этих линий нужно нарисовать боковые конечности;
5. осталось только пририсовать нижние лучи, чтобы они были нарисованы пропорционально уже имеющимся.

Звезда в виде буквы «А»

Самый простой вариант рисования звезды – начать изображение с буквы А. Этапы:

1. для начала нужно нарисовать букву «А». Для этого ее поперечную линию нужно нарисовать чуть выше, чем обычно, и длиннее;
2. затем нужно соединить крайнюю правую точку от поперечной линии с левой точкой от диагональной линии;
3. то же самое нужно повторить и с другой стороны;
4. осталось только стереть лишние линии, которые получились внутри звезды.

Остров Рузвельта Идут ремонтные работы в парке Блэкуэлл, новые безопасные тротуары и площадь, пешеходная дорожка, совместимая с ADA, модернизированная система водоснабжения и скамейки для пикника для тенистой бетонной зоны за пределами библиотеки

Операционная корпорация острова Рузвельта (RIOC) начала работу в июле прошлого года на примерно 1,05 миллиона долларов Проект благоустройства парка Блэквелл для:

… обеспечить более безопасный тротуар и площадь для использования сообществом, это будет обеспечить проход, соответствующий требованиям ADA, к пандусу для дома Блэквелл и открытая зона отдыха за пределами библиотеки NYPL. Кроме того, существующий сайт инженерные сети будут модернизированы, в том числе новый РПЗ …

Ранее в этом месяце строительная площадка Blackwell Park выглядела так

и сегодня

По мере продвижения этапов II и III вокруг Blackwell Plaza были добавлены новые и модернизированные тротуары, а работы по укладке брусчатки продолжаются. Поищите скамейки для пикника и завершите проект этой осенью. pic.twitter.com/5GWOofJpGa

— RIOC NYS (@RIOCny) 14 сентября 2021 г.

По данным RIOC:

В понедельник, 26 июля, Roosevelt Island Operating Corporation (RIOC) начала работу над проектом по благоустройству парка Блэквелл. которые помогут сформировать более безопасное, доступное и гостеприимное открытое пространство как для сообщества, так и для посетителей.

Усовершенствования, которые предлагает проект, включают размещение групп в соответствии с требованиями ADA, отремонтированные пешеходные дорожки и брусчатку для безопасного и плавного передвижения, а также модернизированную систему распределения воды.

Эти улучшения будут происходить в три последовательных этапа:

Этап 1: Реконструкция открытого пространства рядом с филиалом Нью-Йоркской публичной библиотеки на острове Рузвельта, уступив место привлекательной общественной зоне.

Этап 2: Ремонт поврежденных тротуаров и дорожек

Этап 3. Модернизация системы водоснабжения и капитальный ремонт треснувшей брусчатки. Ожидается, что проект будет завершен в начале осени 2021 года.

Некоторые жители выразили сомнения по поводу бетонного пола на открытой площадке с небольшой или отсутствующей тени рядом с общественной библиотекой острова Рузвельта и зеленой зоной Living Gardens.Кроме того, столы для пикника на открытом воздухе рядом с библиотекой, показанные на изображении фазы 3 выше, не подходят для комфортного чтения сидя.

Вот меморандум в поддержку проекта благоустройства парка Блэквелл до заседания Совета директоров RIOC 24 июня 2021 года.

ФОТО: Анимационная Академия возвращается на фестиваль искусств EPCOT

Международный фестиваль искусств EPCOT в самом разгаре, и мы пробуем буквально все, что может предложить фестиваль.

Помимо вкусной и привлекательной еды и напитков, фестиваль предлагает разнообразные возможности для развлечений и мероприятий (например, фотосессии и интерактивное искусство) в течение дня. И сегодня мы опробовали Animation Academy !

Animation Academy — это короткий урок рисования , где художник по персонажам Диснея шаг за шагом научит вас рисовать персонажа Диснея. Анимационная Академия — не новость для Уолта Диснея, но для фестиваля EPCOT это новость!

Интерактивный урок рисования проходит в America Gardens Theater в America Pavilion в 12:30 и 13:30, ежедневно и длится около 20 минут. Не нужно ничего брать с собой, потому что, когда вы приходите в театр, вы берете буфер обмена с прикрепленными бумагой Disney Animation и карандашом!

С момента открытия в театре были изменены места для сидения, поэтому гости рассаживаются в один ряд, разделенные и . Участники должны сидеть на расстоянии не менее 6 футов друг от друга , используя наклейки на скамейке в качестве ориентира. Даже в самые загруженные дни в парке, кажется, много сидячих мест, хотя мы всегда советуем приходить пораньше, если вы действительно хотите поучаствовать!

В начале урока художник персонажей Диснея будет в центре внимания и проведет вас через процесс рисования! За ним легко следить, потому что прямо над художником есть проектор, который позволяет публике видеть каждый идеальный круг, который он делает (наши никогда не бывают такими хорошими!).

По завершении урока рисования вы можете взять с собой карандаш и оригинальный набросок! БЕСПЛАТНЫЙ сувенир! Нам очень понравилось посещать этот урок, и мы подумали, что это новое интерактивное дополнение отлично подходит для Фестиваля искусств!

Узнайте больше о развлечениях на Фестивале искусств 2021 года!

Подпишитесь на рассылку новостей AllEars.net, чтобы быть в курсе ВСЕХ последних новостей Disney! Вы также получите доступ к советам, обзорам, викторинам AllEars и многое другое! Нажмите здесь, чтобы подписаться!

Вы посещали уроки рисования Диснея в парках? Дайте нам знать об этом в комментариях!

Лабораторные методы

Часть G: Методы и материалы

А. Стерильные методы

Стерильная техника — дело относительное. Необходимые меры предосторожности зависят от экспериментальная ситуация, включая используемые питательные среды, конкурентоспособные способности экспериментальный организм, продолжительность эксперимента и предполагаемое использование культуры. Для В этих экспериментах наиболее серьезной проблемой загрязнения является плесень. Растут многие распространенные плесени хорошо на дрожжевой среде и эффективно конкурируют, перерастая чашки и скрывая эти дрожжи которым удается расти.Бактерии представляют меньшую проблему, поскольку большинство из них плохо растут на эти среды и, имея небольшой опыт, можно легко отличить их от дрожжей. Другие штаммы дрожжей могут быть губительными загрязнителями, если они останутся незамеченными. В частности, красные дрожжи, которые иногда появление может сбивать с толку, но отличается от наших красных дрожжей, потому что не требует аденина.

Однако, в отличие от краткосрочных экспериментов, стерилизующие среды должны быть достаточно строгими. потому что хранение дает достаточно времени для развития даже медленно растущих загрязняющих веществ.У нас есть на основании своего опыта пришли к выводу, что хранение носителей в холоде на самом деле контрпродуктивно. Оно делает не предотвращает заражение, но замедляет его рост. Следовательно, загрязнение может остаться незамеченным. пока культуры не инкубируются. Намного лучше хранить носители при комнатной температуре и обнаруживать загрязнение до использования среды.

(1) Стерилизация влажным теплом

Влажное тепло, создаваемое автоклавом или скороваркой, является эффективным способом стерилизации большинство материалов.При давлении на 15 фунтов на квадратный дюйм выше атмосферного, вода достигает температуры примерно 121 ° C, прежде чем он закипит. Большинство материалов эффективно стерилизуются за 15 минут. воздействие этой температуры. Если автоклав недоступен, обычный бытовой напорный плита эффективно стерилизует расходные материалы небольшими партиями.

(2) Стерилизация сухим жаром

Сухие материалы, такие как стекло и металл, можно стерилизовать в духовке, но это требует более высокой температура (160 ° C) и более длительное время (не менее 2 часов), чем в автоклаве.Это наиболее практично для стеклянной посуды, когда доступна духовка, управляемая автоматическим таймером, так что стерилизация и охлаждение может произойти в течение ночи. Использование одноразовой предварительно стерилизованной пластиковой посуды делает печь менее удобной. важный.

(3) Стерилизация пламенем

Пламя газовой горелки эффективно стерилизует небольшие стеклянные или металлические предметы, такие как инокуляционные петли, но следует избегать «поджаривания» дрожжей при контакте с предметами, нагретыми в пламени.Окуните стеклянные разбрасыватели в спирт, а затем воспользуйтесь пламенем, чтобы поджечь спирт. Поместите металлические инструменты, например как петли в пламени, пока они не станут докрасна. Охладите горячие инструменты, прикоснувшись к агару или внутри стерильной стеклянной пробирки. Однако, поскольку пламя опасно, этот метод можно и нужно по возможности избегать. Мы обнаружили, что пламя действительно необходимо только для стерилизации посевные петли и небольшие инструменты. Мы не смогли продемонстрировать какую-либо ценность в зажигание отверстий пробирок, бутылок или колб в этих экспериментах.

(4) Стерилизация спиртом

Во многих экспериментальных процедурах наиболее эффективный способ стерилизации предметов — это спирт этиловый. Либо 95%, либо 70% подойдут. Последний на самом деле более эффективен, но первый более эффективен. часто удобнее. Конечно, спирт должен испариться или сгореть. прежде, чем объект будет использован в контакте с дрожжами. Используйте пламя, чтобы сжечь спирт, свечу обычно дешевле и безопаснее, чем газовая горелка.Алкоголь больше, чем тепло, стерилизации, поэтому просто «зажгите» спирт, чтобы свести к минимуму нагревание и ускорить процесс. Также протрите скамейку со спиртом перед началом эксперимента по удалению заплесневелой пыли, наиболее общий источник загрязнения. Если ваша кожа не особенно чувствительна, протрите руки тоже небольшое количество алкоголя.

(5) Обеспечение стерильности вещей стерильными

Наиболее частым источником загрязнения во время эксперимента является пыль от скамейки, с воздуха и от людей.Это диктует несколько очевидных принципов:
1) Сохраняйте вещи покрыты как можно больше.
2) Не трогайте ничего, что может соприкасаться с культуру, и если вы все-таки прикоснетесь к ней, стерилизуйте ее еще раз перед использованием.
3) Протрите поверхность вокруг эксперимента с алкоголем и минимизировать турбулентность воздуха.
4) Избегайте разговоров, пения, свист, кашель или чихание в направлении вещей, которые должны быть стерильными. Длинные волосы, если нет привязанный назад, может быть источником заражения.
5) Поддерживайте подходящее место для подготовки, хранение и использование стерильных сред. К сожалению, домашние растения, животные и другие материалы, такие как Среда для дрозофилы, обычно встречающаяся в классах биологии, является обильным источником плесени и плесени. следует держать подальше от зоны стерильных процедур.

(6) Изучите свое загрязнение, чтобы его избежать. Время

Если некоторые из ваших чашек с агаром загрязнены, вы часто можете сказать, исследуя табличка, как произошло заражение.Если загрязняющие вещества попадают в агар, Загрязнение, вероятно, было залито средой. Если загрязнение находится под агаром, могли быть в посуде до того, как ее налили, или в нее вошли, когда крышка открывалась, чтобы залить. Если загрязнение находится сверху, оно могло появиться до того, как крышка была закрыта после заливки. открывая крышку, чтобы удалить конденсат, или пока пластина была делается прививка.

(7) Приспосабливайте свои методы к своим Потребности

Соответствующая стерильная техника важна для успешных микробиологических экспериментов, но чрезмерные меры предосторожности могут серьезно отвлекать. Дрожжи и бактерии требуют разных методов из тканевой культуры. Дрожжи быстро растут, опережая большинство вещей, за исключением нескольких нитчатых (нечеткие) грибы и некоторые бактерии. Эксперименты могут стать загрязненными и все равно не потеряться, если студенты используют дрожжи, потому что дрожжи будут расти достаточно хорошо, несмотря на загрязнение, что результаты эксперимента можно прочитать через оскорбительный рост. Поэтому используйте как можно больше осторожность при приготовлении и заливке СМИ.

Д.Рост Медиа

В большинстве экспериментов в этом руководстве используются один или два из следующих типов средств массовой информации:
1) питательно полноценная среда, содержащая субоптимальное количество аденина (YED),
2) питательная полноценная среда, содержащая избыток аденина (YEAD),
3) а химически определенная среда без аденина (MV),
4) химически определенная среда с аденин (MV + Ade),
5) среда для споруляции (YEKAC),
6) среда, используемая для идентифицировать маленькие мутанты (PETITE) и
7) богатую среду, используемую для хранения штаммов дрожжей (YEPAD).

Мы используем среды, приготовленные из имеющихся в продаже ингредиентов. Небольшие дополнительные расходы Использование этих ингредиентов более чем компенсируется их однородностью и надежностью. В экономия, которую можно получить при использовании «домашних» ингредиентов, меньше, чем можно было бы ожидать. потому что мы еще не нашли замену самому дорогому ингредиенту — агару. Несмотря на то что общие источники, такие как различные виды овощных соков, могут обеспечить большинство других ингредиентов, мы пришли к выводу, что жертвовать воспроизводимостью неоправданно.

Среда YED (дрожжевой экстракт + декстроза) будет нашей стандартной питательной средой. Это называется «сложная» среда, потому что она сделана из натуральных ингредиентов (дрожжей) и их точного химического состава. состав не известен. Он содержит все, что есть в дрожжах, включая, конечно, аденин. это также «законченный» носитель. Мутанты, требующие красного аденина, хорошо растут на этой среде и развивают характерный красный пигмент.

Среда YEAD (дрожжевой экстракт + аденин + декстроза) содержит те же ингредиенты, что и YED, но добавлен избыток аденина.Мутанты, требующие красного аденина, хорошо растут на этой среде, и будет не развивают характерный красный пигмент.

Среда YEPAD (дрожжевой экстракт + пептон + аденин + декстроза) содержит те же ингредиенты как YEAD, но с добавлением пептона. Это очень богатая среда, используемая для хранения штаммов дрожжей.

Среда MV (Minimal plus Vitamins) представляет собой среду определенного химического состава, что означает, что она состоит из минимум чистых химических ингредиентов, необходимых для поддержания роста дрожжей дикого типа.Мы будет использовать MV, когда нам нужна среда, не содержащая аденина.

MV + Ade medium (Minimal plus Vitamins + аденин) содержит те же ингредиенты, что и MV, но добавлен избыток аденина.

YEKAC (дрожжевой экстракт плюс ацетат калия) индуцирует образование спор диплоидных дрожжей и пройти мейоз . Это несбалансированное питание, поэтому рост будет очень незначительным.

Среда PETITE содержит глицерин в качестве источника углерода и используется для идентификации небольших колоний. мутанты.Маленькие клетки не будут расти на этой среде.

Рецепты сред для выращивания агара

Если вы используете предварительно расфасованную смесь, следуйте инструкциям на упаковке. Если ты Для взвешивания сухих ингредиентов используйте следующие рецепты. Приведены рецепты приготовления 100 миллилитров. Если вы хотите заработать больше, просто умножьте количество, чтобы получить объем, который вы хотеть. Пример: чтобы получить 500 миллилитров, умножьте каждый ингредиент на 5.Не кладите больше 600 миллилитры в колбе на 1000 миллилитров. Если вы наполните емкости слишком полными, они могут выкипеть во время процесс стерилизации. Для того, чтобы налить одну стандартную 100 x Пластина 15 мм. (Жидкие среды могут быть приготовлены по этим рецептам без агара. )

Декстрозная среда с дрожжевым экстрактом (YED):

1 грамм дрожжевого экстракта
2 грамма безводной декстрозы (глюкозы)
2 грамма агара (агар-агар; гумми-агар)
100 мл воды

Дрожжевой экстракт аденин-декстрозной среды (YEAD):

1 грамм дрожжевого экстракта
2 грамма безводной декстрозы (глюкозы)
2 грамма агара (агар-агар; гумми-агар)
8 мл основного раствора аденина
92 мл воды

Дрожжевой экстракт пептон аденин декстроза среда (YEPAD):

1 грамм дрожжевого экстракта
2 грамма пептона
2 грамма безводной декстрозы (глюкозы)
2 грамма агара (агар-агар; гумми-агар)
8 мл основного раствора аденина
92 мл воды

PETITE Средний:

1 грамм дрожжевого экстракта
0. 025 грамм декстрозы (глюкозы) безводной
2,4 мл глицерина
2 грамма агара (агар-агар; гумми-агар)
98 мл воды

Минимальный с витаминами (МВ):

0,15 г дрожжевой азотной основы без аминокислот и сульфата аммония
0,52 г сульфата аммония
2 грамма безводной декстрозы (глюкозы)
2 грамма агара (агар-агар; гумми-агар)
100 мл воды

Минимальная среда плюс аденин (MV + ade):

0.15 г дрожжевой азотной основы без аминокислот и сульфата аммония
0,52 г сульфата аммония
2,0 г безводной декстрозы (глюкозы)
2,0 г Агара (агар-агар; гумми-агар)
8,0 мл основного раствора аденина
92 мл воды

Среда для споруляции (YEKAC):

1 грамм ацетата калия
0.25 грамм дрожжевого экстракта
2 грамма агара (агар-агар; гумми-агар)
100 мл воды

Базовый раствор аденина

400 мг аденина в 400 мл воды (1 мг / мл)
Хранить при комнатной температуре.
Используйте 2 мл основного раствора на 100 мл среды; уменьшить воду добавлен в среду по 2 мл.

Диски для промокательной бумаги с аденином

1.25 грамм аденина
150 мл дистиллированной воды
бумажные диски для промокательной бумаги
Добавьте аденин в дистиллированную воду в достаточно большом стакане, чтобы раствор не закипал. над. Варить пять минут. Добавьте промокательные бумажные диски и прокипятите еще пять минут. Снимаем диски стерильными щипцами в стерильный закрытый контейнер, например чашку Петри. Поместите их в один слой и дайте им высохнуть в течение нескольких дней.

Э.Стерильная вода

Для многих краткосрочных экспериментов воду можно «стерилизовать» кипячением.
1) налейте воду в неплотно закрытую емкость,
2) поместите емкость в емкость с кипяток в течение 15 минут,
3) после того, как он остынет, закройте емкость для воды крышкой.

Вероятно, лучший способ приготовить стерильную воду — это поставить неплотно прикрытую воду емкости в автоклаве или скороварке, а затем стерилизовать воду под тем же условия, используемые для питательных сред.

F. Температура инкубации и скорость роста

Оптимальная температура роста для этих штаммов составляет примерно 30 ° C, но они будут вполне удовлетворительно растут в гораздо более широком диапазоне. Все эти эксперименты можно провести в комфортная комнатная температура, но дрожжи переносят практически любую температуру, которую могут люди. Однако температура повлияет на скорость роста. При более низких температурах клетки будут расти медленнее, и скорость должна определяться экспериментально.Время инкубации оценивается в эти эксперименты основаны на инкубации при температурах в пределах одного или двух градусов от 30 ° C.

Фактически, можно замедлить дрожжи, охладив их, чтобы эксперименты соответствовали классу. расписания. Просто охладите или просто охладите тарелки на разных стадиях, чтобы замедлить рост. Однако имейте в виду, что после того, как культура была охлаждена, может наступить период задержки. за несколько часов до того, как он снова начнет расти. Конечно, если он достиг стационарной фазы, он не будет расти дальше при любой температуре.

Штаммы дрожжей действительно можно хранить в течение длительного времени в холодильнике при температуре температуры чуть выше нуля. Некоторые штаммы будут продолжать расти, хотя и очень медленно, при эти температуры, но большинство из них остаются жизнеспособными в течение недель или месяцев, а некоторые — годами.

Следует избегать температур выше 30 ° C. Хотя клетки будут расти при более высоких При высоких температурах в них накапливаются нежелательные маленькие мутации, и спороношение сильно подавляется.Красный пигмент у мутантов аденина также подавляется при более высоких температурах. Безопаснее всего инкубируйте спорулирующие культуры при комфортной комнатной температуре.

Инкубируйте культуры в темноте или при слабом освещении. удобный. Хотя это и не критично, длительное пребывание в обычной комнате свет или более яркий свет снизят жизнеспособность клеток, которые содержат красный пигмент. Чувствительный к УФ-излучению штамм G948-1C / U не должен имеют длительное воздействие источников света.

Для оптимального роста и развития красного пигмента чашки должны быть аэробными. Мы инкубируйте чашки в открытых пластиковых пакетах для хранения продуктов. Достаточно кислорода, когда пакеты открыты для поддержки аэробного дыхания. Пластиковые пакеты предохраняют тарелки от слишком быстрого высыхания, защищают их от загрязнений и облегчить их переноску, не пролив.

G. Использование зубочисток и петель для вакцинации

Для большинства целей самый простой способ переместить дрожжи из одного места в другое на агаре. средний — стерильной зубочисткой.Плоскую зубочистку использовать проще, чем круглую. Заостренный конец полезен для отбора образцов из отдельных колоний или для создания небольших пятен. или полосы. Плоский конец хорошо подходит для распределения дрожжей, для их разметки, чтобы изолировать отдельные колонии и для смешивания. Зубочистки стерильны прямо из коробки, если в коробке нет был загрязнен. Просто прорежьте один угол, чтобы сделать небольшое отверстие (от 1/4 до 1/2 дюйма в поперечнике). а коробка будет служить дозатором.Зубочистки в коробке направлены в обе стороны, но Вы можете легко выбрать желаемый конец для любой задачи. Конечно, нужно позаботиться о том, чтобы обращаться с каждая зубочистка только за кончик, который не касается дрожжей или среды.

Зубочистка — альтернатива традиционной петле для посева, которая доступна коммерчески, даже в платине. Мы делаем наши собственные петли для посева из куска от 6 до 8 дюймов. латунный пруток (используемый для пайки) и нихромовая проволока.Просверлите небольшое отверстие возле конца стержня, чтобы закрепите проволоку, вставьте конец проволоки в отверстие, намотайте несколько витков вокруг стержня и оставьте один-два дюйма проволоки прямыми. В конце прямого участка сформируйте петлю с парой плоскогубцы. Обжигайте провод в бунзеновской горелке, пока он не загорится красным, чтобы стерилизовать его перед каждым использовать и, конечно же, дать ему остыть, прежде чем он коснется (или поджарится) дрожжей. Прикосновение к агару сразу охлаждает.

ЧАС.Распределяющие ячейки

Есть несколько способов разложить клетки. Они используют различные типы оборудования для дозирования и различные методы перемещения клеток по поверхности агара.
Количественный метод нанесения покрытия методом заливки
Этот метод требует подготовки отдельной пробирки для окончательного разбавления для каждого планшета и затем все содержимое пробирки выливается на поверхность агара. Этот метод имеет преимущество в том, что не требуется использование пламени.Его недостаток в том, что он не такой воспроизводимый.

1. Сделайте серию разведений от 1 до 10 суспензий дрожжевых клеток.
2. Перенесите 0,1 мл соответствующей суспензии в стерильную пробирку, содержащую 0,9 мл стерильная вода. Вращайте пробирку, чтобы приостановить клетки, а затем вылейте все содержимое пробирку на поверхность агаровой среды. Наклоните и поверните пластину, чтобы распределить суспензию по поверхности агара.
3. Если есть пятна, которые не покрываются, используйте стерильную зубочистку, чтобы размазать подвешивание над непокрытыми участками.

Суспензию необходимо дать впитаться в агар, прежде чем чашки будут подвергнуты воздействию экспериментальное лечение. Чтобы ускорить процесс, сделайте чашки с агаром несколько дней в заранее и дайте им немного подсохнуть, прежде чем заливать дрожжевую суспензию.

В видео-разделе «Последовательное разведение и подсчет жизнеспособных клеток» показан метод заливки.

Количественный метод распределения
Если вам нужны точные данные, лучше использовать альтернативный метод покрытия. Сотовый суспензия аккуратно наносится на поверхность агара, а затем распределяется стерильным разбрасыватель. Разбрасыватели бывают двух типов:

Разбрасыватель скрепок без пламени
Вы можете легко сделать недорогой разбрасыватель многоразового использования, выпрямив два изгиба в большом канцелярская скрепка, оставляя конец в форме шпильки для растягивания и прямую ручку под прямым углом к ​​нему.Вы можете стерилизовать несколько разбрасывателей вместе в закрытых мензурках или завернутых в фольгу или бумагу.
Распылитель пламенного стекла
Если у вас есть оборудование и навыки для работы со стеклянным стержнем, вы можете сделать простой разбрасыватель стекла. нагревая и сгибая один дюйм на конце короткого куска стеклянного стержня. Эти также можно приобрести разбрасыватели.

1. Сделайте серию разведений от 1 до 10 суспензий дрожжевых клеток.
2. Используйте новый наконечник для дозатора 0.1 мл соответствующей суспензии на агаре поверхность. Перед взятием пробы постучите по пробирке. Если вы делаете несколько тарелок Вы можете пипетировать клетки в каждую чашку, используя один и тот же наконечник для пипетки, а затем распределить их не поджигая распределитель между каждой пластиной.
3. Стерилизуйте разбрасыватель в 95% этаноле, а затем пропустите разбрасыватель через пламя, чтобы зажечь спирт. Осторожно удерживайте разбрасыватель, пока весь спирт на разбрасывателе не полностью горит.Использование пламени алкоголя — опасный шаг, требующий осторожности. и тщательный контроль со стороны учителя.
4. Охладите разбрасыватель, прикоснувшись им к агару. Используйте плоскую сторону, чтобы разложить подвешивание над поверхностью; затем используйте изогнутую часть расширителя, чтобы сделать перекрывающиеся штрихи. Поверните тарелку на 90 градусов и повторите процесс изготовления. перекрывающиеся штрихи. Крышку можно держать над пластиной, чтобы минимизировать загрязнение. Избегайте распространения суспензии до края, где она может стекать между агаром. и сторона чашки Петри.

В разделе видео «Использование дрожжей для измерения солнечного УФ-излучения» показано покрытие разбрасывателя из пламенного стекла. метод.

Метод качественной заливки для производства газонов из ячеек
Этот метод обеспечивает густой равномерный рост клеток (газон) по поверхности агара. пластина. Это быстрый метод, который полезен для множества качественных экспериментов.

1. Сделайте мутную суспензию дрожжевых клеток.
2.Нанести пипеткой 1,0 мл суспензии на поверхность агаризованной среды. Наклоните и поверните чашку, чтобы равномерно распределить суспензию по поверхности агара.
3. Если есть пятна, которые не покрываются, используйте стерильную зубочистку, чтобы размазать подвешивание над непокрытыми участками.

Как и в методе количественной заливки, суспензия должна пропитаться . агар перед экспериментальной обработкой планшетов.Если вы сделаете чашки с агаром за несколько дней и дайте им немного подсохнуть, прежде чем заливать дрожжевую суспензию. ускорить процесс.

Раздел видео Влияние солнечного УФ-излучения на элементы иллюстрирует метод заливки покрытия для лужайка.

I. Автоматические микропипетки, серологические пипетки и Одноразовые пипетки с шариками

Автоматические дозаторы — это рабочие лошадки современной молекулярной биологии и микробиология.Они быстрые и точные и позволяют сэкономить много времени и нервов. В Эксперименты в этом руководстве часто требуют использования дозатора 0,1 мл. Хотя они относительно дорогие, они делают работу настолько быстрой, что ее могут легко разделить несколько студентов или лабораторию группы. Вы будете использовать его для серийных разведений и для посева клеток на агаре. Стерильные наконечники расфасованы в многоразовые пластиковые диспенсеры. Практикуйтесь в использовании дозатора с водой, пока не почувствуете комфортно с этим.(Если автоматические микропипетки недоступны, их можно заменить одноразовые пипетки с шариками, серологические пипетки или градуированные капиллярные трубки)

1. Плотно прижмите маленький конец дозатора к открытому концу наконечника, пока наконечник все еще в дозаторе.
2. Чтобы заполнить его, медленно нажимайте на поршень до тех пор, пока не почувствуете сопротивление, но не до упора. возможный. Погрузите наконечник в раствор, а затем медленно отпустите поршень.Если любые капли налипают на кончик, протрите их краем емкости.
3. Поместите наконечник в жидкость в пробирке, в которую вы вводите пипетку, и медленно нажмите. поршень. На этот раз нажмите как можно глубже, чтобы удалить весь образец. Выньте кончик дозатора из раствора, отпустите поршень и выбросьте Подсказка.

Серологические пипетки и пипеточные насосы могут использоваться вместо автоматических пипеток.Эти пипетки дадут очень точные измерения объема. Возможна покупка предстерилизованных серологические пипцы нескольких размеров. У вас должен быть набор дозирующих насосов, доступных для учащихся. использовать с этими пипетками. Помните, что никогда не следует набирать жидкость ртом. пипетка. Даже стерильной воды!

Одноразовые пипетки с луковицами также подходят для большинства экспериментов в этом справочнике. Три капли из пипетки объемом один миллилитр примерно равны 0.1 мл. Громкость измерения не такие точные, но эти пипетки дешевы и не требуют использования пипетки. насосы. Эти пипетки также можно приобрести предварительно стерилизованными и индивидуально упакованными. В обертки предварительно стерилизованных пипеток служат удобным стерильным держателем для пипеток во время Экспериментальная процедура.

J. Создание субкультуры дрожжей

Питательные вещества для дрожжей могут поступать в твердую или жидкую среду.Когда дрожжи штаммы поступают от поставщика, они обычно выращиваются на скошенном агаре. Если вы держите эти уклоны плотно закрытые и охлажденные, их можно хранить до одного года. Меньшие наклоны позволяют использовать зубочистки, чтобы переместить дрожжи. Лучше всего иметь свежие культуры для ваших экспериментов. Итак, день перед тем, как вы собираетесь использовать дрожжи, перенесите небольшое количество клеток из исходной культуры в свежие. средний (обычно ДА). Вы можете использовать обожженную петлю для переноса клеток, но стерильная зубочистка не помешает. обычно проще.Прикоснитесь зубочисткой к ячейкам на склоне; вам не нужно переносить много ячеек. Сделайте полосу из клеток на поверхности агара; старайтесь не выдавливать поверхность агара. Этот Процедура выращивания свежих дрожжей называется субкультивированием. Вы должны субкультивировать не менее 12 часов прежде чем вы собираетесь использовать дрожжи.

Иногда посевы будут отправлены из центров по хранению дрожжей на бумажных носителях. Сделать свежий субкультура: стерильно откройте фольгу и с помощью стерильных пинцетов поместите небольшой квадрат молочной бумаги. на стерильной пластине YED с агаром.Если вы протрите агар бумагой несколько раз, вы получите использовать отдельные колонии, и на месте размещения бумаги вырастет большое пятно клеток. Это займет от 3 до 5 дней для многих штаммов, выращенных таким образом, чтобы вырасти до подходящего размера. Культур отправлено таким образом они менее уязвимы к неблагоприятным погодным условиям и длительному времени в пути.

K. Изоляция одиночных колоний

Многие эксперименты требуют выращивания колоний из изолированных одиночных клеток.Это легко осуществляется штриховкой культур на пластине с агаром плоским концом зубочистки. В цель метода состоит в том, чтобы последовательно разбавить клетки на поверхности агара, перекрывая друг друга. полосы, пока отдельные клетки не будут разделены или распределены с образованием изолированных одиночных колоний. Фигура 11> ниже проиллюстрирована техника, которую вы должны практиковать, пока не достигнете совершенства.

Рисунок 11: Изоляция одиночных колоний

Первым шагом является сделайте одиночную короткую полоску клеток (длиной около 2 см) возле края агара в чашке Петри.Новой зубочисткой нарисуйте вторую полосу внахлест под углом примерно 15 градусов к первый, перетаскивая ячейки из первой полосы на свежий агар. Сделайте еще несколько параллельных полос с та же зубочистка. Затем возьмите новую зубочистку и повторить процесс, начиная с конца последнего полоса. Повторяйте эту последовательность, пока вся тарелка был покрыт. Поскольку популяция клеток, производится из одного родительская клетка является клоном, это процесс клонирования дрожжи.Если культура не чиста по какой-либо причине, это обеспечивает метод выделения чистых клонов. В такого же результата можно достичь, используя пламенный и охлаждаемая петля на каждом шаге, где свежая зубочистка использовал. Этот подход более медленный и рискует поджарить клетки.

L. Replica Покрытие

В некоторых экспериментах мы переносим многие культуры из одного вида среды к одному или нескольким другим видам, к определить рост культур требования.Это можно сделать с помощью зубочистки или петли, но если есть очень много штаммов для передачи становится трудоемкий. Простой, быстрый способ — покрытие реплики — сыграло важную роль в развитие микробной генетики и является одним из величайших экономистов всех время. Описанные ниже эксперименты можно обойтись без этой техники, но это интересно делать и стоит Проблема с его настройкой. Даже при скромных эксперименты, усилие хорошее инвестиции в долгосрочной перспективе.

Принцип покрытия реплики что из штампа.

Рисунок 13: Покрытие реплики

Штамп из хлопкового вельвета используется для штамповки копии узора. клеток, растущих на одной пластине, на одну или несколько других пластин. Аппарат состоит из цилиндрический держатель для вельвета, размер которого идеально подходит для дна чашки Петри тарелку и какое-то кольцо, чтобы удерживать вельвет на месте. Для стандартных пластиковых тарелок 10 см подходящий диаметр составляет примерно 3.3 дюйма. Держатель может быть цилиндром из дерева, металла, пластик или любой другой материал, который вы можете изготовить. Это может быть даже баночка с едой на фунт или другая тяжелая цилиндрическая емкость, если дно ровное. (Круг, вырезанный из подноса для мяса из пенопласта, плоская поверхность, чтобы надеть банку с едой) Кольцо для удержания вельвета может быть большим зажимом для шланга, некоторые другой найденный предмет, или даже большая резинка.

Вельвет, конечно, необходимо стерилизовать, а недавно разрезанный хлопковый вельвет обычно требует перед стерилизацией удалите ворсинки с помощью куска малярной ленты.Автоклав и сушить тщательно. Мы используем шестидюймовые квадраты, которые складываем и оборачиваем бумагой, автоклавируем, а затем сушим. на настройках вакуума. Если автоклав недоступен, просушите их в теплой духовке или просто дайте им сидеть на прилавке, пока они не высохнут. Чтобы повторно использовать вельветовые квадраты, промойте их в простой воде и повторно стерилизовать. Вместо хлопка можно использовать другие ткани, например, несколько слоев хлопковой марли. вельвет.

Чтобы воспроизвести тарелку, переверните эталонную тарелку с дрожжами поверх вельвета. держатель и плотно прижмите пластину к стерильной тканевой поверхности.Затем медленно очистите тарелку выключить, оставив копию или отпечаток клеточного узора на вельвете. Перенести реплику на вельвета на одну или несколько стерильных тарелок, осторожно прижимая каждую тарелку к вельвету и выскакивает. Можно сделать до 20 копий с одной мастер-пластины, если необходимо. Процедура проиллюстрирована на Рисунке 13.

Способ, которым вы снимаете пластину с вельвета, контролирует количество дрожжи перенесены из вельвета в тарелку или из тарелки в вельвет.Если вы очистите мастер-пластину от вельвета медленными перекатывающими движениями на бархате останется больше дрожжей, чем если бы вы лопнули выключите его быстрым вертикальным движением. Желательно перенести как можно меньше ячеек и при этом возможность видеть отпечаток ячеек на реплике пластины.

М. Оценка количества дрожжевых клеток в Культура

Существует множество способов прямого подсчета клеток, наиболее распространенными из которых является подсчет клеток. камеры для микроскопа или электронных счетчиков частиц.Они имеют мало поучительной ценности в генетика и не подходят для общего использования в классе. Поэтому мы разработали эксперименты, не зависящие от точного подсчета частиц. Когда требуется подсчет клеток, мы определите их по количеству колоний на чашках (см. Разведение и посев Процедуры ).

Однако многие эксперименты требуют приблизительных оценок количества клетки в жидкой суспензии, чтобы получить разумное количество колоний.Для этого вы будет использовать один из самых сложных и чувствительных существующих оптических инструментов: человеческий глаз. С удивительно небольшой практикой вы можете научиться оценивать количество клеток в суспензии. просто посмотрев на это.

Визуальная оценка плотности клеток основана на довольно резком пороге зрения глаза для наблюдения помутнение. При просмотре в стандартной пробирке 13 x 100 мм дрожжевые суспензии менее 1 миллиона клеток на мл не являются заметно мутными.Выше этой пороговой плотности они заметно мутны. К доводя количество клеток в суспензии до тех пор, пока они не станут едва заметными, можно получить суспензию. известной плотности (приблизительно 1 x 106 клеток / мл), а затем использовать серийные разведения для получения других концентрации. (См. Также эксперимент Серийные разведения и подсчет жизнеспособных клеток )

Материалы:

• Стерильные закрытые культуральные пробирки 13 x 100 мл.
• Стерильная вода
• Стерильные пипетки 1 мл (одноразовые пипетки с шариками или серологические пипетки и пипетка)
• Микропипетка и стерильные наконечники (опция)

Процедура:
а.Налейте в пробирку 1-2 мл стерильной воды.
б. Воспользуйтесь охлажденной обожженной инокуляционной петлей или стерильной зубочисткой, чтобы подвесить небольшой количество дрожжей размером с булавочную головку в воде.
c. Тщательно перемешайте суспензию, свободно держа пробирку возле ее верха. между большим и указательным пальцами и ударьте по нему снизу ладонная сторона одного или нескольких пальцев другой руки, создавая завихрение движение.(Ударное движение приближается к жесту, который можно было бы сделать, чтобы помани кого-нибудь сюда.)
Эта суспензия должна содержать приблизительно 1 x 107 клеток / мл, но это плотность трудно судить, поэтому мы разбавим его, прежде чем судить о его плотность.
d. Пипетируйте 0,9 мл стерильной воды в пробирку с помощью стерильной пипетки на 1,0 мл.
е. Развести 0.В эту пробирку поместите 1 мл суспензии ваших клеток и взбейте ее. Сравните это с пробиркой, содержащей стерильную воду. Если пробирка с клетками едва мутная, тогда он содержит почти 1 х 106 клеток / мл.
f. Если пробирка не является заметно мутной, добавьте дополнительные 0,1 мл раствора. подвеска оригинальная, пока она есть. Если вы думаете, что он мутнее предела видимость, затем добавьте еще стерильной воды.Отрегулируйте объемы воды и ячеек пока вы не убедитесь. Следите за добавляемыми объемами, чтобы знать, какое окончательное разбавление вы сделали.

N. Процедуры разбавления и нанесения покрытия

Во многих экспериментах необходимо разложить на пластине приблизительно известное количество клеток. разрастаться в колонии. Мы используем серийные разведения, делая несколько небольших разведений одно за другим, вместо того, чтобы делать одно большое разведение.Метод экономит материал и позволяет избежать использования больших объемы, которые трудно измерить и стерилизовать.

Материалы:

• Стерильные закрытые культуральные пробирки 13 x 100 мл.
• Стерильная вода
• Стерильные пипетки 1 мл (одноразовые пипетки с шариками или серологические пипетки и пипетка)
• Микропипетка и стерильные наконечники (опция)
• Скрепка или разбрасыватель стекла: клетки распределены по поверхности агар с разбрасывателями.

Приготовление серийных разведений:
Следующая процедура дает серию разведений, которые различаются в десять раз. Вы сможете использовать эту процедуру для большинства экспериментов, требующих серийного разведения (рисунок 12).

Рисунок 12: Последовательное разбавление-покрытие Стратегия

а. Приготовьте суспензию, содержащую примерно 1 x 106 клеток / мл в стерильном воды, используя процедуру, описанную в Оценка количества дрожжей Клетки в культуре.
б. Пипетка 0,9 мл стерильного воды в каждую из трех пробирки и промаркируйте их. Мы рекомендую сделать диаграмма в вашем блокноте показывая процедуру и смысл твоего этикетки.
c. Ресуспендируйте клетки в оригинальная подвеска. Удалите 0,1 мл микропипеткой и свежим наконечником и перенесите в один из трубки с водой.Затем постучите по трубке, чтобы приостановить клетки.
d. Повторите процедуру последовательно, используя новую пипетку или наконечник для каждой пипетки. оставшиеся пробирки так, чтобы каждая пробирка содержала 1/10 числа ячеек Предыдущая. Третье разведение должно содержать примерно 1 х 103 клеток / мл.

Нанесение разведений:
Если вы ожидаете, что все клетки вырастут, вы будете вносить только последнее разведение, так как другие трубки будут слишком концентрированными, и пластины, сделанные из них, будут содержат слишком много колоний для подсчета.Однако в радиационных экспериментах вы будете используйте разведения, содержащие больше клеток, чтобы компенсировать уменьшенное количество клеток которые переживают облучение. Таким образом вы получите оптимальное количество колоний для считайте на каждой пластине, даже если большинство клеток мертво.

е. У вас будут лучшие данные, если вы сделаете все посевы в двух или трех экземплярах. Первый Пометьте пластины маркером (Pilot SC-UF или Sharpie).(Вы будете также используйте эту же ручку для маркировки колоний при подсчете их.) Мы рекомендуем вам идентифицировать каждую пластину с номером деформации, доза (для радиационных экспериментов), табличка с разведением и ваши инициалы, но вы может предпочесть закодировать эту информацию в своих заметках и поставить кодовые буквы или цифры на табличке. Пишите только на крышке или маленькими буквами по краю дно, оставляя дно чистым для маркировки колоний, когда вы посчитай их.

f. Ресуспендируйте клетки в каждой пробирке, ударив по ней перед взятием образца, затем нанесите пипеткой 0,1 мл в центр каждой из дублирующих планшетов. Если вы используете раскладчики скрепок извлекают из конверта стерильный раскладчик. Если ты с помощью разбрасывателя стекла вынуть его из спирта, поджечь на пламени и после пламя горит, дотроньтесь им до агара одной из пластин подальше от клетки.Распределите клетки по поверхности любым распределителем, стараясь держите клетки на расстоянии не менее 0,5 см от края агара. (Если вы используете Пипеткой для метода посева перелейте 0,1 мл суспензии в 0,9 мл стерильной воды. Смешайте клетки с водой. Вылейте всю смесь на агар. поверхность, затем наклоните и поверните тарелку, пока смесь не распределится равномерно по поверхности. поверхность агара.)

О.Микроскопическое исследование дрожжей

Самый простой способ исследовать дрожжи под микроскопом — смотреть на них прямо на пластина. Это работает только с маломощными объективами (10x), потому что более мощные тоже близко к агару и затуманивается. Чтобы увидеть больше деталей, сделайте слайд с мокрым креплением. Нанеси каплю воды предметное стекло микроскопа. С помощью стерильной зубочистки перенесите небольшое количество дрожжей в воду и перемешайте. маленький. Затем накройте дрожжевую суспензию на предметном стекле покровным стеклом.Если подготовка должна быть при просмотре нескольких студентов, приклейте покровное стекло к слайду с помощью лака для ногтей и слайда. будут доступны для просмотра в течение нескольких часов. Погружение в масло не требуется, а просто соблюдая форму клеток, окрашивать их не нужно. При использовании подходящих методов окрашивания ядро можно увидеть, но хромосомы дрожжей слишком малы, чтобы их можно было увидеть при большом количестве света микроскопы.

Для демонстрации в классе вы можете использовать видеомикроскоп.Есть ряд очень хорошие видеомикроскопы, доступные на рынке. Если у вас его нет, можно получить многие из тех же результатов с классным микроскопом и домашней видеокамерой. Когда мы смотрим через микроскоп наши глаза сфокусированы на бесконечности. Если разместить видеокамеру рядом с окуляр микроскопа и установите фокус камеры на бесконечность, он «увидит» то же, что и наш глаза. Это помогает исключить попадание света сбоку, обернув объектив камеры и окуляр микроскопа с куском темной ткани или алюминиевой фольгой.

П. дрожжевые штаммы

В экспериментах используются следующие штаммы:

Гаплоиды:

В. Облучение дрожжей ультрафиолетом Радиация

Стандартные бактерицидные УФ-лампы с разрядом паров ртути низкого давления. Пробирки являются идеальным источником ультрафиолета для облучения дрожжей дикого типа нормальными ферментами репарации ДНК.Солнечные или кварцевые галогенные фонари являются хорошими источниками ультрафиолета для облучения мутантных штаммов дрожжи с дефицитом нормальных ферментов репарации ДНК.

Стандартные бактерицидные лампы УФ-С представляют собой обычные люминесцентные лампы без люминесцентной лампы. покрытие и оболочка, прозрачная для ультрафиолета. Ртуть низкого давления Спектр представляет собой линейчатый спектр с наиболее заметной линией, имеющей длину волны 253,7 нанометры. Это случайно близко к 260 нанометрам, оптимальным для поглощения ДНК.

Дизайн У.В. Радиационная камера продиктована несколькими соображениями, наиболее важным является безопасность. (См. Инструкции по созданию камеры УФ-излучения ) Излучение бактерицидных ламп вызывает болезненные и опасные ожоги глаз и кожи. поэтому они должны быть эффективно защищены. Воздействие на клетки невозможно контролировать, поворачивая лампа включается и выключается, потому что выходная сила лампы сильно зависит от температуры.Следовательно, он должен быть заключен в экранированный ящик с механизмом заслонки, чтобы он мог нагреваться до постоянная температура перед использованием. Дверь и ставень должны быть заблокированы, чтобы они не могут быть открыты одновременно.

Порядок работы камеры УФ-излучения:

1. Подключите лампу и включите ее. Вы можете с уверенностью сказать, когда лампа на, увидев световой индикатор.
2. Если возможно, дайте лампе нагреться в течение 30 минут.
3. Отцентрируйте чашку Петри по метке на дне чашки. ящик, снимите крышку пластины, осторожно опустите дверцу и откройте заслонку. Измерьте время экспозиции с момента открытия затвора. Когда время истекло, закройте ставни, аккуратно поднимите дверцу, наденьте крышку чашку Петри и удалите ее. Слишком быстрое перемещение двери вызывает воздух турбулентность, которая может вызвать загрязнение чашек с агаром.Если коробка оснащена лампой UV-B, аналогичная процедура может быть последовал.

Порядок экспонирования с использованием солнечных лучей или кварцевых галогенных фонарей:

1. Накройте посуду темной бумагой и, пока она остается накрытой, блюдо под углом 90 градусов к источнику света. Если вы используете кварцевый галогенный свет снимите стеклянную крышку с светильника. В то время как солнце и уличный свет производят меньше УФ-излучения, чем бактерицидные трубки следует принимать разумные меры предосторожности.Не смотри прямо у источника и избегайте любого длительного прямого контакта с кожей.

ВНИМАНИЕ! Кварцевая галогенная лампа очень сильно нагревается. Использование этой лампы должно быть под прямым присмотр учителя.

2. Снимите темную крышку с пластины и начните измерять время воздействия. По истечении времени накройте блюдо и переместите его. в инкубатор. Обычно нет необходимости снимать крышку с пластиковые чашки Петри при использовании солнечных или кварцевых галогенных ламп как источник ультрафиолета.Большинство пластиковых чашек Петри прозрачны для длины волн УФ-излучения, создаваемого этими источниками. Вы можете захотеть бежать пробный эксперимент на каждой новой партии чашек Петри. Если вы получаете уровень выживаемости выше, чем вы ожидаете, возможно, вы захотите удалить крышки при УФ-облучении. Если загрязнение становится проблемой, вы можете хотите накрыть посуду тонкой полиэтиленовой пленкой или пакетом для бутербродов. Эти тонкие пластиковые пленки не поглощают значительное количество ультрафиолета.

Нажмите здесь, чтобы вернуться

Последнее обновление Среда, 24 февраля 1999 г.

Lysee Washers — Популярные марки 20шт M19 латунные прокладки плоские ультратонкие шайбы

Разнообразие, инклюзивность и справедливость

Наш Заявление о разнообразии и справедливости

Последние сборники и статьи о расовом неравенстве

Изучить хаб

Летающая большая белая акула: лучшая фотография Криса Фаллоуса | Искусство и дизайн

На планете нет более знаковых видов, чем большая белая акула.Все знают, что они собой представляют, даже в самых не имеющих выхода к морю странах на Земле, и люди очарованы ими. Большие белые акулы на острове Сил, в нескольких милях от залива Фолс-Бэй, недалеко от Кейптауна, используют технику охоты на поверхности, называемую прорывом. Они прячутся в глубине в ожидании морских свиней, плывущих по волнам, а затем с невероятной скоростью устремляются к поверхности. Их чистая сила выводит их из воды и приводит к этим драматическим нарушениям, которые стали известными на документальных каналах по всему миру.

Акулы, как правило, охотятся по-разному в зависимости от среды обитания. На Фараллонских островах недалеко от Сан-Франциско они откусывают ласты тюленей и дают им истечь кровью. Но на острове Сил определенные факторы окружающей среды способствуют такому виду воздушной охоты. Во-первых, это идеальная топография: мелководье быстро превращается в глубину, а это значит, что акулы, патрулирующие более глубокие воды, могут удивить свою добычу. Скрытность — ключ к успеху.

Во-вторых, акулы как раз в подходящем возрасте. Очень молодые акулы не склонны питаться добычей млекопитающих, а большие более старые акулы, как правило, охотятся на более крупных, медленных животных.Рядом с островом Сил водятся акулы-подростки, которые достаточно сильны и проворны, чтобы очищать воду. И наконец, о печатях. Они достаточно малы, чтобы стать идеальной добычей для больших белых подростков. Эти факторы сочетаются на Острове Сил, как нигде на Земле, в результате чего получилось это невероятное воздушное зрелище.

Я положил пленку камеры на проявку в пятницу. Когда я вернулся в понедельник, все хлопали в ладоши.