Фак нарисованный: Фак из символов — Рисунки символами, картинки из символов, символы для вк

Содержание

Фак из символов — Рисунки символами, картинки из символов, символы для вк

.
░░░░░░░░░░░░░░░▄▄░░░░░░░░░░░
░░░░░░░░░░░░░░█░░█░░░░░░░░░░
░░░░░░░░░░░░░░█░░█░░░░░░░░░░
░░░░░░░░░░░░░░█░░█░░░░░░░░░░
░░░░░░░░░░░░░░█░░█░░░░░░░░░░
██████▄███▄████░░███▄░░░░░░░
▓▓▓▓▓▓█░░░█░░░█░░█░░░███░░░░
▓▓▓▓▓▓█░░░█░░░█░░█░░░█░░█░░░
▓▓▓▓▓▓█░░░░░░░░░░░░░░█░░█░░░
▓▓▓▓▓▓█░░░░░░░░░░░░░░░░█░░░░
▓▓▓▓▓▓█░░░░░░░░░░░░░░██░░░░░
▓▓▓▓▓▓█████░░░░░░░░░██░░░░░░
█████▀░░░░▀▀████████░░░░░░░░

.
░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░
░░▄▀░░░▄░░░▄▀▀▄▀▄░░░░░░░░░░░░░
░█░░░░▐▐░░█░░▐▐░░▐░░░░░░▄▄░░░░
░█░░░░░▀░░░▀▄░▀░░▐░░░░░▐░░▐░░░
░█░░░░░░░▄░░▐░░░░▐░░░▄▄▐░░▐▄▄░
░░▀▄░░░░▄░▀▀░▄░░▄▀░░▐░░▐░░▐░▐░
░░░░▀░░░░▀▀▀▀░░▀░░░░▐░░░░░░░▐░
░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░

.
░░░░░░░░░░░▄▄▄▄░░░░░░░░░░░░░░
░░░░░░░░░▄█████████▄▄▄░░░░░░░
░░░░░░░░▐███████████████▄▄░░░
░░░░░░░░███████████████████▄░
░░░░░░░█████████████████████▌
░░░░░░▐█▀▀▀▀██▀▒▒▒▒▒▒▒▒▒▀███░
░░░░░▐▒▒▒▒▒▒▒▒▒▒▒▒▒▒▒▒▒▒▒▒█░░

░░░░░▌▒▒▒▒▒▒▒▒▒▒▒▒▒▒▒▒▒▒▒▒▌░░
░░░▄▀▀▀▀▄▒▒▒▒▒▀▀▀▄▄▒▒▒▒▒▒▒▐░░
░░▐▒▄▀▀▒▒▒▒▒▒▄▄▄▄▄▒▒▒▒▒▀▄▄▐░░
░░▐▒▒▒▀▒▒▒▒▒▒▒▌▀▒▌▒▒▒▀▄▄▄▒▐░░
░░░▀▄▒▄▒▒▒▒▒▒▒▒▀▀▒▒▒▌▒▌▀▐▒▌░░
░░░░▐▀▒▒▒▒▒▒▒▒▒▒▒▒▒▒▐▒▒▀▒▐░░░
░░░░▌▒▒▒▒▒▒▒▒▒▒▒▒▀▄▄▒▀▒▒▒▌░░░
░░░▐▒▒▒▒▒▒▒▒▒▒▄▄▄▄▒▒▒▒▒▒▐░░░░
░░▄▌▒▒▒▒▒▒▒▒▒▒▒██████▄▒▐░░░░░
░█▐▒▒▒▒▒▀▒▒▒▒▒▒▒▀▀██▀▒▐░░░░░░
▀▒▐▒▒▒▒▒▒▀▒▒▒▒▒▒▒▒▒▒▒▐░░▄▄░░░
░░░▐▒▒▒▒▒▒▒▀▄▒▒▒▒▒▒▒▐░░▐░░▐░░
░░░░▐▒▒▒▒▒▒▒▒▀▄▄▄▄▄▀░▄▄▐░░▐▄▄
░░░░░▐▒▒▒▒▒▒▒▒▒▌▌░░░▐░░▐░░▐░▐
░░░░░▐▒▒▒▒▒▒▒▐▐ ░░░░▐░░░░░░░░▐

.
…………/´¯/)…….
…………/….//…….
………../….//……..
……/´¯/…./´¯\…..
…/./…/…./…./.|_..
(.(….(….(…./.)..)..
.\…………….\/…/..
..\…………….. /…..
….\…………..(…….
……\………….\……

.
…………/´¯/)…………..(\¯`\…… ……

…………/….//…………..\\….\………..
………../….//…………….\\….\……….
……/´¯/…./´¯\…………/¯` ….\¯`\…..
…/./…/…./…./.|_….._|.\….\….\…\.\..
(.(….(….(…./.)..)…..(..(.\….)….)….).)
.\…………….\/…/….\…\/……………./
..\…………….. /……..\………………/.
….\…………..(…………)…………../…
……\………….\………../…………./….

.
:::::::::::::/”\
::::::::::::|\:/|
::::::::::::|:::|
::::::::::::|:~|
::::::::::::|:::|
:::::::::/’\|:::|/’\::
:::::/”\|:::|:::|:::|:\
::::|:::[@]:::|:::|::\
::::|:::|:::|:::|:::|:::\
::::|:~:~::~::~:|::::)
::::|:::::::::::::::::::/
:::::\:::::::::::::::::/
::::::\:::::::::::::::/

.
░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░

░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░████░░░
░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░█▀──▀█░░
░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░█────█░░
░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░█────█░░
░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░█────█░░
░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░█────█░░
░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░█────█░░
░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░█────█░░
░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░█────█░░
░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░█────█░░
░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░█────█░░
░░░░░░░░░░░░░░░░░░████░░███████░░
░░░░░░░░░░░░░░░░░██──████▀────█░░
░░░░░░░░░░░░░░░░██────██──────█░░
░░░░░░░░░░░░░░░██────██───────█░░
░░░████████░░░██────██────────█░░
░░█████████████─────██──▄█▄───█░░
░░██████████────────██▄████───█░░
░░█████████──────────▀▀███▀───█░░
░░█████████───────────────────█░░
░░█████████───────────────────█░░
░░█████████───────────────────█░░
░░█████████───────────────────█░░
░░█████████───────────────────█░░
░░█████████──────────────────██░░
░░██████████───────────────███░░░
░░██████████████████████████░░░░░

░░░████████░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░
░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░░

.
─────────────────────────────
────────────▄████▄───────────
───────────▄██████▄──────────
───────────█──────█──────────
───────────█──────█──────────
───────────█─▄▄▄▄─█──────────
───────────█──────█──────────
───────────█──────█──────────
───────────█─▄▄▄▄─█──────────
───────────█──────█──────────
───────────█──────█──────────
───────────█─▄▄▄▄─█──────────
───────────█──────█──────────
───────────█──────█──────────
───────────█─▄▄▄▄─█▄▄▄▄──────
────▄███████──────█▀█─▀██▄───
▄█████─────█──────█──█─▀██▄──
█────█─────█──────█───█──██▄─
█────█─────█──────█────█──██▄
█────█─────█──────█─────█──██
█────█─────█──────█─────█─██▀
█────█─────█──────█─────███▀─

█────█─────█──────█─────██▀──
█───────────────────────██───
███▄────────────────────█▀───
─▀███▄────────────────▄██────
───▀████████████████████▀────
─────▀████████████████▀──────
────────▀███████████▀────────

.
┏━┳┳┳━┳┳┓
┃━┫┃┃┏┫━┫┏┓
┃┏┫┃┃┗┫┃┃┃┃
┗┛┗━┻━┻┻┛┃┃
┏┳┳━┳┳┳┓┏┫┣┳┓
┃┃┃┃┃┃┃┃┣┻┫┃┃
┣┓┃┃┃┃┣┫┃┏┻┻┫
┗━┻━┻━┻┛┗━━━┛

.
▂▂▂▂▂▂╭━╮▂▂▂▂▂▂▂
▂▂▂▂▂▂┣━┫▂▂▂▂▂▂▂
▂▂▂▂▂▂┃╭┃▂▂▂▂▂▂▂
▂▂▂▂╭━┫┈┣━╮▂▂▂▂▂
▂▂╭━┃╭┃╭┃╭┃━╮▂▂▂
▂▂╲╭┃╯┃╯┃╯┃╭┃▂▂▂
▂▂▂▏┃┈┃┈┃┈┃┈┃▂▂▂
▂▂▂╰╮▂▂▂▂▂▂╭╯▂▂▂

Faq PNG, векторы, PSD и пнг для бесплатной загрузки

знак вопроса векторная icon

1299*1299

Знак вопроса о бизнес технологиях

2800*2000

знак вопроса значок вектор

1499*1499

знак вопроса значок вектор

1399*1399

знак вопроса векторная icon

1199*1199

значок прокси проекта

5120*5120

знак вопроса векторная icon

1199*1199

Знак вопроса о технологиях

3000*3000

Красный знак вопроса

2000*2000

значок вопросительного знака в модном стиле изолированные фон

5120*5120

Ручной обращается завод компьютер faq бизнес иллюстрация

1200*1200

часто задаваемые вопросы и пакет изометрических значков службы поддержки клиентов

1200*1200

Нарисованная рукой иллюстрация работы завода faq дела

1200*1200

Рисованной мультфильм часто задаваемые вопросы бизнес завод иллюстрации

1200*1200

faq

4000*4000

помощь призыв консультации faq помощь бизнес схема де

5556*5556

набор панелей twitch stream с прозрачными

5000*5000

значок информации для вашего проекта

5120*5120

Нарисованная рукой иллюстрация работы дела faq дела

1200*1200

значок информации изолированных на абстрактном фоне

5120*5120

Нарисованная рукой иллюстрация завода faq дела

1200*1200

faq

5556*5556

Нарисованная рукой иллюстрация компьютера работы faq дела

1200*1200

faq

5556*5556

помощь призыв консультации faq помочь присоединиться шаблон

5556*5556

Рисованной мультфильм завод часто задаваемые вопросы

1200*1200

Часто задаваемые вопросы faq значок набор векторных иллюстраций

5000*5000

добавить проверь близко исключить faq значок в идеальной пиксель квартиру дизайн подтвердить иконы комплекс вопрос удалить

4000*4000

Нарисованная рукой иллюстрация завода работы faq дела

1200*1200

помощь призыв консультации faq помочь 5 цвета глиф веб икона

5556*5556

faq Векторный icon set

5000*5000

помощь призыв консультации faq помочь присоединиться шаблон

5556*5556

Нарисованная рукой иллюстрация faq зеленого завода дела

1200*1200

Ручной обращается онлайн бизнес faq office иллюстрация

1200*1200

помощь призыв консультации faq горячая линия по transpare значок

5556*5556

помощь призыв консультации faq помочь квартиру значок зеленого и и

5556*5556

faq

5556*5556

помощь призыв консультации faq помочь логотип синего и

5556*5556

помощь призыв консультации faq помочь значок вектор серой линии

5556*5556

помощь призыв консультации faq помочь присоединиться шаблон

5556*5556

помощь призыв консультации faq помочь сине желтый бизнес l

5556*5556

faq помощь звоните консультации помощь иконки в тонкие очередной

5556*5556

Мультяшный персонаж облако faq Иллюстрация

1200*1200

Нарисованная рукой иллюстрация офиса завода faq дела

1200*1200

помощь синий логотипа в faq призыв консультации помочь

5556*5556

помощь призыв консультации faq горячая линия в carousal значок

5556*5556

Нарисованная рукой иллюстрация компьютера faq работы компьютера

1200*1200

помощь призыв консультации faq помочь им sym значок вектор

5556*5556

Проект использует faq

2175*2154

помощь призыв консультации faq помочь квартиру бизнес логотип теа

5556*5556

помощь призыв консультации faq помочь им значок в мобильном f

5556*5556

Нарисованная рукой иллюстрация завода faq дела

1200*1200

Нарисованный рукой мультипликационный персонаж оранжевый faq иллюстрация

1200*1200

помощь призыв консультации faq помочь квартиру цвет значок вектор

5556*5556

помощь призыв консультации faq помочь им значок

5556*5556

помощь призыв консультации faq помочь присоединиться шаблон

5556*5556

помощь призыв консультации faq помочь ровная линия заполнена значок

5556*5556

помощь призыв консультации faq помочь белой линией значок colorf

5556*5556

помощь призыв консультации faq линия помощи icon в мобильном фо

5556*5556

помощь призыв консультации faq помощь бизнес логотип линия мок

5556*5556

Бизнес рисованной часто задаваемые вопросы

1200*1200

Нарисованный от руки мультипликационный персонаж синий faq иллюстрация

1200*1200

Ручной обращается бизнес офис компьютер часто задаваемые вопросы

1200*1200

Нарисованный рукой мультипликационный персонаж оранжевый faq иллюстрация увеличительного стекла

1200*1200

Портрет из квадратиков и кружочков: russhatter — LiveJournal

: Шляпник (russhatter) wrote,
2009-12-06 23:21:00 Шляпник
russhatter
2009-12-06 23:21:00

Category:

Music: Корабли — у пирса (это, впрочем, другая зима)

Было это 20 лет назад, и ещё с небольшим хвостиком.

Пёстрая студенческая компания проводила зимние каникулы в некоем месте на берегу Белого Моря. Один персонаж с физ-фака, крайне разнообразных дарований, отъезжал раньше отряда, а уезжая, оставил некий тетрадный листок, на котором много чего было нарисовано. Вернее, зашифровано. Главное: на листочке были нарисованы кружочки, а между ними — стрелочки. В кружочках — написаны инициалы персонажей компании, и это, собственно, единственное, что удалось на листочке понять. Где-то с угла, или на обороте были ещё какие-то точки и квадратики, и отбывающий персонаж охотно объяснил, что они означают. Означали они, что автор не просто рисовал, а что-то подсчитывал, глядя на стрелочки и кружочки. Что именно считал автор, что означали стрелочки — было глубоко непонятно. Так оно и осталось. Замечу, что стрелочки были сплошные, пунктирные, штрих-пунктирные, а, может, ещё и волнистые, разные в-общем.

Половина отряда впала в оторопь, другая половина попыталась понять смысл, но обломала зубы. Не найдя там главного: кто же в кого?.

.. Я, мне кажется, бился над листочком дольше всех, перебирая вовсе не только схемы любовных треугольников и квадратов… Но тоже ничего не достиг.
Но всё-таки я что-то придумал. Придумал — картину.
На картине изображён только один кружочек, и в нём стоят только одни инициалы. А вокруг кружочка — мощная сеть стрелочек, всевозможных расцветок и оформлений. Стрелочки начинаются около кружочка, долго-долго петляют, пересекаются, завязываются в узлы, извиваются и затягиваются, но напоследок-таки втыкаются острыми иголками назад в кружочек.
Ну, и рядом — сбоку, нарисованы куча точек, квадратиков и чисел, фиксирующих сию непростую конфигурацию. Человека, как он есть.

Да, какие инициалы? Конечно: А.А.

Наше дело правое?
Выношу свой коммент в отдельный пост. Когда я возвращался в страну чуть более 15 лет назад, у меня были серьёзные намерения поучаствовать в…
Личное мнение: надо ли учиться на программиста?
Написал письмо другу. Почему бы его тут не воспроизвести?… Мне кажется, что это дурь — учиться программированию. Программирование есть ремесло, а…
+Бремзен Андрей
Я очень редко с ним пересекался, но каждый раз, когда случалось, это было душевно. Мы были друзьями — хоть и редко. Родственная он душа, и светлый…

Photo

Hint http://pics.livejournal.com/igrick/pic/000r1edq

Василий К. — Молодой дьявол songtekst en vertaling

Songteksten

Как там дела у соседа?
Фак, лучше, чем у меня!
Вдруг возьмёт да успеет?
Глубже, глубже яма моя
Ямаямаямамоя
Не прощайся с ним — время раннее
Вам ещё лететь вдвоём по трубе
Я копирую в письмо вечности
Всё что он говорил тебе
Ты не можешь быть некрасивой
Мне не веришь — спроси у врача
В середине тебя горит солнце
Потому ты так горяча
Пей Молодой Дьявол!
Пей! Пой!
Пей молодой Дьявол!
И оставайся со мной!
Пей Молодой Дьявол!
Пей! Пей! Пой!
Пей молодой Дьявол!
И оставайся со мной!

Songtekstvertaling

Getekend door de geest van iemand anders
Het silhouet is niet duidelijk waarom
Straining-afgewezen,
Maar dit is gewoon een liedje over:
Hoe de Sudras geriteld,
Als ik vurig verachtelijk en lief voor mezelf ben
Genieten van uw rust
Uit haar kamers kwamen
Drink Jonge Duivel!
Drink! Zing!

Drink jonge duivel!
En blijf bij me.

Botten breken, de vlaggen verscheurd
Van bloem tot bloem in laarzen
Wie leeft en wie schrijft verhalen
Over helden en dwazen
Ik ben zo verward als een hoer in een kerk.
Voor de lijst van uw problemen
Als een golf op een lichaam
Je liet ze voor altijd aan mij over.
Drink Jonge Duivel!
Drink! Drink! Zing!
Drink jonge duivel!
En blijf bij me.
Hoe ze hun eigen graven groef,
En uit de harde aarde
Babylonische persoonlijke torens
In de hemel, in de naam van de liefde
Hoe gaat het met de buurman?
FAK, beter dan ik!
Wat als hij het neemt en tijd heeft?
Dieper, dieper is mijn put
Mamamama
Neem geen afscheid van hem — het is nog vroeg
Je moet nog steeds samen vliegen op de buis.
Ik Kopieer naar de letter van de eeuwigheid
Alles wat hij je vertelde
Je kunt niet lelijk zijn.
Als je me niet gelooft, vraag het dan aan de dokter.
De zon brandt in het midden van jou
Daarom ben je zo sexy.

Drink Jonge Duivel!
Drink! Zing!
Drink jonge duivel!
En blijf bij me.
Drink Jonge Duivel!
Drink! Drink! Zing!
Drink jonge duivel!
En blijf bij me.

Василий К. — Paroles et traduction des paroles de la chanson Молодой дьявол

Paroles

Нарисованный чужим разумом
Силуэт непонятно чего
Напрягаешься — отторгается,
А ведь это просто песня про то:
Как шуршали Шудры,
Когда я сам себе ярко мерзок и мил
Наслаждаясь своим покоем
Из покоев её выходил
Пей Молодой Дьявол!
Пей! Пой!
Пей молодой Дьявол!
И оставайся со мной!
Кости ломаны, флаги порваны
С цветка на цветок в сапогах
Кто живет, а кто пишет истории
О героях и о дураках
Я растерян как шлюха в церкви
Перед списком твоих проблем
Как волна берегу тело
Ты оставил их мне насовсем
Пей Молодой Дьявол!
Пей! Пей! Пой!
Пей молодой Дьявол!
И оставайся со мной!
Как копали себе могилы,
А из вынутой тяжко земли
Вавилонские личные башни
Рядом — в небо, во имя любви
Как там дела у соседа?
Фак, лучше, чем у меня!
Вдруг возьмёт да успеет?
Глубже, глубже яма моя
Ямаямаямамоя
Не прощайся с ним — время раннее
Вам ещё лететь вдвоём по трубе
Я копирую в письмо вечности
Всё что он говорил тебе
Ты не можешь быть некрасивой
Мне не веришь — спроси у врача
В середине тебя горит солнце
Потому ты так горяча
Пей Молодой Дьявол!
Пей! Пой!
Пей молодой Дьявол!
И оставайся со мной!
Пей Молодой Дьявол!
Пей! Пей! Пой!
Пей молодой Дьявол!
И оставайся со мной!

Traduction des paroles

Dessiné par l’esprit étranger
La silhouette est incompréhensible
T’efforces ainsi — отторгается,
Mais c’est juste une chanson sur quelque chose:
Comment bruissaient les Shudra,
Quand je suis moi-même vivement méchant et gentil
Profiter de sa paix
Elle sortait de ses quartiers
Bois Le Jeune Diable!
Bois! Chante!
Bois le jeune Diable!
Et reste avec moi!
OS cassés, drapeaux déchirés
De fleur en fleur en bottes
Qui vit et qui écrit des histoires
Sur les héros et les imbéciles
Je suis confus comme une salope dans une église
Avant la liste de tes problèmes
Comme une vague de corps
Tu me les as laissés pour de bon.
Bois Le Jeune Diable!
Bois! Bois! Chante!
Bois le jeune Diable!
Et reste avec moi!
Comment creuser des tombes,
Et de la terre arrachée
Tours personnelles babyloniennes
Près du ciel, au nom de l’amour
Comment va le voisin?
FAK, mieux que moi!
Tout à coup, il le prendra et il aura le temps?
Plus profond, plus profond ma fosse
Yamayamayamamoya
Ne lui dis pas au revoir-le temps est tôt
Vous avez encore à voler ensemble dans le tuyau
Je copie dans la lettre de l’éternité
Tout ce qu’il t’a dit
Tu ne peux pas être laide
Vous ne me croyez pas — demandez au médecin
Au milieu de toi, le soleil brûle
Parce que tu es si chaude.
Bois Le Jeune Diable!
Bois! Chante!
Bois le jeune Diable!
Et reste avec moi!

Шкурки — Сообщество Империал — Страница 2

Дата: 02 авг 2021, 19:57

Дата: 30 июл 2021, 15:22

Дата: 27 июл 2021, 19:34

Дата: 17 июл 2021, 21:58

Дата: 16 июл 2021, 20:20

Дата: 16 июл 2021, 20:00

Дата: 16 июл 2021, 19:33

Дата: 14 июл 2021, 16:49

Дата: 27 мая 2021, 18:25

Дата: 27 мая 2021, 18:13

Дата: 13 мая 2021, 15:24

Дата: 13 мая 2021, 15:21

Дата: 11 мая 2021, 19:20

Дата: 11 мая 2021, 19:08

Дата: 08 мая 2021, 19:32

Дата: 08 мая 2021, 19:04

Дата: 08 мая 2021, 18:36

Дата: 08 мая 2021, 17:53

Дата: 08 мая 2021, 16:56

Дата: 08 мая 2021, 16:18

Дата: 08 мая 2021, 15:24

Дата: 07 мая 2021, 18:45

Дата: 06 мая 2021, 11:28

Дата: 15 апр 2021, 19:33

Дата: 15 апр 2021, 16:04

Дата: 15 апр 2021, 15:44

Дата: 15 апр 2021, 15:21

Дата: 10 апр 2021, 08:45

Дата: 07 апр 2021, 17:14

Дата: 02 апр 2021, 17:49

Дата: 02 апр 2021, 17:39

Дата: 02 апр 2021, 17:27

Дата: 02 апр 2021, 10:25

Дата: 01 апр 2021, 20:07

Дата: 01 апр 2021, 20:04

Дата: 01 апр 2021, 20:00

Дата: 27 мар 2021, 16:45

Дата: 25 мар 2021, 16:52

Дата: 23 мар 2021, 16:42

Дата: 23 мар 2021, 13:58

Дата: 15 мар 2021, 12:55

Дата: 02 мар 2021, 11:29

Дата: 22 фев 2021, 20:10

Дата: 22 фев 2021, 10:43

Дата: 03 фев 2021, 20:39

Дата: 03 янв 2021, 17:01

Дата: 29 дек 2020, 12:46

Дата: 29 дек 2020, 11:29

Дата: 28 дек 2020, 19:01

Дата: 28 дек 2020, 00:16

Французы рассказали о концепте PGO Cevennes Water Snake — ДРАЙВ

Новые 18-дюймовые колёса с шинами Michelin Pilot Sport Cup — одно из отличий шанхайского образца от серийных «собратьев», на тех стоят диски лишь на 17 дюймов.

Компания PGO выпустила официальные снимки и толику подробностей относительно шоу-кара Cevennes Water Snake, который впервые был представлен в Шанхае в конце апреля. Тогда мы предполагали, что синий кузов двухдверки Cevennes, скроенный из карбоновых панелей, предназначался исключительно для китайских клиентов (ведь фирма PGO впервые вышла на рынок Поднебесной). Теперь же выясняется, что такой вариант корпуса для этой модели вскоре смогут заказать и клиенты в других странах. И в целом шоу-кар продемонстрировал изменения, приготовленные для обычных PGO Cevennes.

Сплиттер в переднем бампере и мощные дуги за сиденьями, элементы спортивного антуража станут опциями для серийного варианта.

Французский ретрокар, нарисованный по мотивам Porsche 356, оснащается турбомотором BMW 1.6 (184 л.с., 240 Н•м), что немало при весе менее тонны. Коробка передач — «механика» на шесть ступеней.

Среднемоторный аппарат длиной всего 3,7 метра обладает багажником объёмом 110 л. Топливный бак вмещает 42 литра, а средний расход топлива равен 7,6 л/100 км.

Особый шарм концепту придаёт глубокий синий оттенок кузовных деталей из углеволоконного композита под полупрозрачным лаком.

По всей видимости, с концепта на мелкосерийные машины перекочуют различные мелкие улучшения, в частности новые фары и дневные ходовые огни. Также обратить внимание стоит на улучшенную отделку салона с использованием карбоновых деталей и кожи с эффектной прострочкой и на консоль с развлекательной системой марки Pioneer. Увы, компания пока не поясняет, в каком порядке и в какие сроки перемены перейдут с шоу-кара на серийные машины и во сколько клиентам обойдутся эти симпатичные новшества.

Низкомолекулярный активатор FAK способствует закрытию раны монослоя кишечного эпителия человека и заживлению язв у мышей.

Лофтус, Э. В. Младший. Последние данные о заболеваемости и распространенности воспалительных заболеваний кишечника в Соединенных Штатах. Гастроэнтерол Гепатол (N Y) 12 , 704–707 (2016).

Google Scholar

Смертность, ГББ, причины смерти, C. Глобальная, региональная и национальная половая возрастная зависимость от всех причин и смертность от 240 причин смерти, 1990–2013 годы: систематический анализ для глобального Исследование бремени болезней, 2013 г. Lancet 385 , 117–171, https://doi.org/10.1016/S0140-6736(14)61682-2 (2015).

Артикул Google Scholar

Folkman, J. et al. . Язва двенадцатиперстной кишки. Открытие нового механизма и разработка ангиогенной терапии, ускоряющей заживление. Ann Surg 214 , 414–425; обсуждение 426–417 (1991).

CAS Статья Google Scholar

Cabodi, S. et al. . Интегрины и передача сигналов. Adv Exp Med Biol 674 , 43–54 (2010).

CAS Статья Google Scholar

Yu, C.F., Sanders, M.A. & Basson, M.D. Подвижность caco-2 человека перераспределяет FAK и паксиллин и активирует p38 MAPK матрично-зависимым образом. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 278 , G952–966, https: // doi.org / 10.1152 / ajpgi.2000.278.6.G952 (2000).

CAS Статья PubMed Google Scholar

Walsh, M. F. et al. . Трансформирующий бета-фактор роста стимулирует синтез киназы фокальной адгезии кишечного эпителия через Smad- и p38-зависимые механизмы. Am J Pathol 173 , 385–399, https://doi.org/10.2353/ajpath.2008.070729 (2008).

CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

Irwin, J. J. & Shoichet, B. K. ZINC — бесплатная база данных коммерчески доступных соединений для виртуального скрининга. J Chem Inf Model 45 , 177–182, https://doi.org/10.1021/ci049714+ (2005).

CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

Рашка, С. и др. . Идентификация потенциальных низкомолекулярных белок-белковых ингибиторов метастазирования рака с помощью компьютерного скрининга на основе трехмерных эпитопов. J Physiol Pharmacol 69 , https://doi.org/10.26402/jpp.2018.2.11 (2018).

Ding, X. et al . SLC26A3 (DRA) предотвращает индуцированную TNF-альфа дисфункцию барьера и острый колит, индуцированный декстрансульфатом натрия. Lab Invest 98 , 462–476, https://doi.org/10.1038/s41374-017-0005-4 (2018).

CAS Статья PubMed Google Scholar

10.

Хольшер, Х.Д., Дэвис, С. Р. и Таппенден, К. А. Олигосахариды грудного молока влияют на созревание клеточных линий Caco-2Bbe и HT-29 кишечника человека. J Nutr 144 , 586–591, https://doi.org/10.3945/jn.113.189704 (2014).

CAS Статья PubMed Google Scholar

11.

Hwang, S. et al. . E-cadherin имеет решающее значение для миграции коллективных листов и регулируется хемокином белка CXCL12 во время восстановления. J Biol Chem 287 , 22227–22240, https://doi.org/10.1074/jbc.M112.367979 (2012).

CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

12.

Коваленко, П. Л., Куновска, Л., Чен, Дж., Галло, К. А. и Бассон, М. Д. Потеря передачи сигналов MLK3 препятствует заживлению язв, модулируя передачу сигналов MAPK в слизистой оболочке кишечника мыши. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 303 , G951–960, https: // doi. org / 10.1152 / ajpgi.00158.2012 (2012).

CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

13.

Сонг, Х. и др. . Кукурбитацин Е подавляет пролиферацию и миграцию эпителиальных клеток кишечника посредством активации кофилина. Front Physiol 9 , 1090, https://doi.org/10.3389/fphys.2018.01090 (2018).

Артикул PubMed PubMed Central Google Scholar

14.

Zhang, J., Owen, C. R., Sanders, M. A., Turner, J. R. & Basson, M. D. Мотогенные эффекты циклической механической нагрузки на закрытие раны монослоем кишечного эпителия зависят от матрикса. Гастроэнтерология 131 , 1179–1189, https://doi.org/10.1053/j.gastro.2006.08.007 (2006).

Артикул PubMed Google Scholar

15.

Коваленко П. Л., Фланиган Т. Л., Чатурведи Л. и Бассон М.D. Влияние дефункционализации и механических сил на заживление кишечных эпителиальных ран. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 303 , G1134–1143, https://doi.org/10.1152/ajpgi.00321.2012 (2012).

CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

16.

Owen, C. R., Yuan, L. & Basson, M. D. Мыши с нокаутом Smad3 обнаруживают нарушение заживления слизистой оболочки кишечника. Lab Invest 88 , 1101–1109, https: // doi.org / 10.1038 / labinvest.2008.77 (2008).

CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

17.

Баатар, Д. и др. . Язвы пищевода активируют фактор роста кератиноцитов и его рецепторы у крыс: последствия для заживления язв. Гастроэнтерология 122 , 458–468 (2002).

CAS Статья Google Scholar

18.

Фукумото, К. и др. . Роль фактора некроза опухоли альфа в патогенезе индуцированного индометацином повреждения тонкой кишки у мышей. Int J Mol Med 27 , 353–359, https://doi.org/10.3892/ijmm.2011.602 (2011).

CAS Статья PubMed Google Scholar

19.

Ямада, С. и др. . Уменьшение повреждения тонкой кишки, вызванного индометацином, у мышей с дефицитом интерлейкина-17A. J Гастроэнтерол Hepatol 26 , 398–404, https://doi.org/10.1111/j.1440-1746.2010.06496.x (2011).

CAS Статья PubMed Google Scholar

20.

Бассон М. Д. и др. . Schlafen 12 Взаимодействие с SerpinB12 и деубиквитилазами способствует дифференцировке энтероцитов человека. Cell Physiol Biochem 48 , 1274–1290, https://doi.org/10.1159/000492019 (2018).

CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

21.

Йитман Т. Дж. Возрождение SRC. Nat Rev Cancer 4 , 470–480, https://doi. org/10.1038/nrc1366 (2004).

CAS Статья PubMed Google Scholar

22.

Chaturvedi, LS, Marsh, HM & Basson, MD Роль RhoA и его эффекторов ROCK и mDia1 в модуляции индуцированных деформацией мотогенных сигналов FAK, ERK, p38 и MLC в кишечном эпителии человека Caco-2 клетки. Am J Physiol Cell Physiol 301 , C1224–1238, https: // doi.org / 10.1152 / ajpcell.00518.2010 (2011).

CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

23.

Митра, С. К., Хансон, Д. А. и Шлепфер, Д. Д. Киназа фокальной адгезии: в управлении и контроле подвижности клеток. Nat Rev Mol Cell Biol 6 , 56–68, https://doi.org/10.1038/nrm1549 (2005).

CAS Статья PubMed Google Scholar

24.

Серрелс, А. и др. . Идентификация потенциальных биомаркеров для измерения ингибирования активности киназы Src в раковых клетках толстой кишки после лечения дазатинибом. Mol Cancer Ther 5 , 3014–3022, https://doi.org/10.1158/1535-7163.MCT-06-0382 (2006).

CAS Статья PubMed Google Scholar

25.

Su, Y. & Besner, G.E. Гепарин-связывающий EGF-подобный фактор роста (HB-EGF) способствует миграции и адгезии клеток через киназу фокальной адгезии. J Surg Res 189 , 222–231, https://doi.org/10.1016/j.jss.2014.02.055 (2014).

CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

26.

Бассон, М. Д. и др. . Уровни белка киназы фокальной адгезии в моторике эпителия кишечника. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 291 , G491–499, https://doi.org/10.1152/ajpgi.00292.2005 (2006).

CAS Статья PubMed Google Scholar

27.

Хайм, Дж. Б. и др. . Миозин-1E взаимодействует с FAK-богатой пролином областью 1, индуцируя матрикс фибронектинового типа. Proc Natl Acad Sci USA 114 , 3933–3938, https://doi.org/10.1073/pnas.1614894114 (2017).

CAS Статья PubMed Google Scholar

28.

Lietha, D. et al. . Структурная основа аутоингибирования киназы фокальной адгезии. Cell 129 , 1177–1187, https: // doi.org / 10.1016 / j.cell.2007.05.041 (2007).

CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

29.

Марлоу, Т. А., Лензо, Ф. Л., Фигель, С. А., Виноград, А. Т. и Рак, У. Г. Онкогенные рецепторные тирозинкиназы непосредственно фосфорилируют киназу очаговой адгезии (FAK) как механизм устойчивости к ингибиторам FAK-киназ. Mol Cancer Ther 15 , 3028–3039, https://doi.org/10.1158/1535-7163.MCT-16-0366 (2016).

CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

30.

Парсонс, Дж. Т. Киназа фокальной адгезии: первые десять лет. J Cell Sci 116 , 1409–1416 (2003).

CAS Статья Google Scholar

31.

Хан Р. И. и др. . Активация киназы очаговой адгезии через мускариновый ацетилхолиновый рецептор M1 необходима для восстановления барьерной функции кишечника после повреждения эпителия. Biochim Biophys Acta 1842 , 635–645, https://doi.org/10.1016/j.bbadis.2013.12.007 (2014).

CAS Статья PubMed Google Scholar

32.

Li, J. et al. . Схизандрин B предотвращает язвенный колит и рак, связанный с колитом, активируя киназу фокальной адгезии и влияя на микробиоту кишечника в модели in vivo и in vitro . Eur J Pharmacol 854 , 9–21, https: // doi.org / 10.1016 / j.ejphar.2019.03.059 (2019).

CAS Статья PubMed Google Scholar

33.

Xie, Y. et al. . Роль киназы фокальной адгезии в облегчении сократительных реакций гладких мышц дна желудка мышей. J Physiol 596 , 2131–2146, https://doi.org/10.1113/JP275406 (2018).

CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

34.

Conway, W. C. et al. . Паксиллин модулирует адгезию плоскоклеточных раковых клеток и играет важную роль в адгезии под давлением. J Cell Biochem 98 , 1507–1516, https://doi.org/10.1002/jcb.20819 (2006).

CAS Статья PubMed Google Scholar

35.

Крейг Д. Х. и др. . Колхицин подавляет индуцированную давлением имплантацию опухолевых клеток в хирургические раны и увеличивает выживаемость без опухолей у мышей. J Clin Invest 118 , 3170–3180, https://doi.org/10.1172/JCI34279 (2008).

CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

36.

Wang, J. et al. . MicroRNA-1224 подавляет метастазирование опухоли при раке желудка кишечного типа путем прямого воздействия на FAK. Front Oncol 9 , 222, https://doi.org/10.3389/fonc.2019.00222 (2019).

Артикул PubMed PubMed Central Google Scholar

37.

Усечак П., Гейтс А. и Вебстер С. Р. Активация киназы фокальной адгезии и JNK способствует внеклеточному матриксу и опосредованному цАМФ-GEF выживанию в результате индуцированного желчной кислотой апоптоза в гепатоцитах крысы. J Hepatol 49 , 251–261, https://doi.org/10.1016/j.jhep.2008.04.015 (2008).

CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

38.

Сирацучи, Х. и Бассон, М.D. Внеклеточное давление стимулирует фагоцитоз макрофагов путем ингибирования пути, включающего FAK и ERK. Am J Physiol Cell Physiol 286 , C1358–1366, https://doi. org/10.1152/ajpcell.00553.2003 (2004).

CAS Статья PubMed Google Scholar

39.

Лю Ю.В., Сандерс М.А. и Бассон М.Д. Подвижность кишечного эпителия человека Caco-2 связана с сигналами тирозинкиназы и фокальной киназы адгезии цитоскелета. J Surg Res 77 , 112–118, https://doi.org/10.1006/jsre.1998.5369 (1998).

CAS Статья PubMed Google Scholar

40.

Tilghman, R. W. et al. . Киназа фокальной адгезии необходима для пространственной организации переднего края мигрирующих клеток. J Cell Sci 118 , 2613–2623, https://doi.org/10.1242/jcs.02380 (2005).

CAS Статья PubMed Google Scholar

41.

Jiang, X., Jacamo, R., Zhukova, E., Sinnett-Smith, J. & Rozengurt, E. РНК-интерференция показывает различную роль FAK и Pyk2 в миграции клеток, формировании переднего края и увеличении фокальных адгезий, вызванных LPA в эпителиальных клетках кишечника. J Cell Physiol 207 , 816–828, https://doi.org/10.1002/jcp.20629 (2006).

CAS Статья PubMed Google Scholar

42.

Ю., К. Ф.И Бассон, М. Д. Матрикс-специфическая реорганизация FAK и MAPK во время подвижности клеток Caco-2. Microsc Res Tech 51 , 191–203, https://doi.org/10.1002/1097-0029(20001015)51:2<191::AID-JEMT10>3.0.CO;2-1 (2000) .

43.

Кристиансен, Дж. Дж. И Раджасекаран, А. К. Переоценка перехода эпителия в мезенхиму как предпосылку инвазии и метастазирования карциномы. Cancer Res 66 , 8319–8326, https://doi.org/10.1158/0008-5472.CAN-06-0410 (2006).

CAS Статья PubMed Google Scholar

44.

Lefort, C. T., Wojciechowski, K. & Hocking, D. C. Комплексы адгезии N-кадгерин-клетка регулируются сборкой фибронектинового матрикса. J Biol Chem 286 , 3149–3160, https://doi. org/10.1074/jbc.M110.115733 (2011).

CAS Статья PubMed Google Scholar

45.

Frismantiene, A., Philippova, M., Erne, P. & Resink, T. J. Кадгерины в биологии гладкомышечных клеток сосудов (пато): Quid nos scimus? Cell Signal 45 , 23–42, https://doi.org/10.1016/j.cellsig.2018.01.023 (2018).

CAS Статья PubMed Google Scholar

46.

Джонсон Т., Чжао Л., Мануэль Г., Тейлор Х. и Лю Д. Подходы к терапевтическому ангиогенезу при ишемической болезни сердца. J Mol Med (Berl) , https://doi.org/10.1007/s00109-018-1729-3 (2018).

Артикул Google Scholar

47.

Пауэлл, Р. Дж., Каррут, Дж. А., Бассон, М. Д., Бладгуд, Р. и Сумпио, Б. Е. Матрично-специфический эффект эндотелиального контроля миграции гладкомышечных клеток. J Vasc Surg 24 , 51–57 (1996).

CAS Статья Google Scholar

48.

Brami-Cherrier, K. et al. . Димеризация FAK контролирует его зависимые от киназы функции в очаговых адгезиях. EMBO J 33 , 356–370, https://doi.org/10.1002/embj.201386399 (2014).

CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

49.

Липински, К. А. Свинец и подобные лекарственным средствам соединения: революция по правилу пяти. Drug Discov Today Technol 1 , 337–341, https: // doi.org / 10.1016 / j.ddtec.2004.11.007 (2004).

CAS Статья PubMed Google Scholar

50.

Бассон, М. Д. Иерархия исцеления при повреждении слизистой оболочки кишечника. J Physiol Pharmacol 68 , 789–795 (2017).

CAS PubMed Google Scholar

51.

Kurashima, Y. & Kiyono, H. Экологическая сеть слизистой оболочки эпителия и иммунных клеток для гомеостаза кишечника и заживления тканей. Annu Rev Immunol 35 , 119–147, https://doi.org/10.1146/annurev-immunol-051116-052424 (2017).

CAS Статья PubMed Google Scholar

52.

Сейделин, Дж. Б., Коскун, М. и Нильсен, О. Х. Заживление слизистой оболочки при язвенном колите: патофизиология и фармакология. Adv Clin Chem 59 , 101–123 (2013).

CAS Статья Google Scholar

53.

Пауэлл, Р. Дж., Бхаргава, Дж., Бассон, М. Д. и Сумпио, Б. Е. Условия кокультивирования изменяют эндотелиальную модуляцию активации TGF-бета 1 и морфологию роста гладких мышц. Am J Physiol 274 , H642–649, https://doi.org/10.1152/ajpheart.1998.274.2.H642 (1998).

CAS Статья PubMed Google Scholar

54.

Бассон М. Д., Модлин И. М. и Мадри Дж. А. Миграция энтероцитов человека (Caco-2) модулируется in vitro за счет состава внеклеточного матрикса и эпидермального фактора роста. J Clin Invest 90 , 15–23, https://doi.org/10.1172/JCI115828 (1992).

CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

55.

Chaturvedi, L., Sun, K., Walsh, MF, Kuhn, LA & Basson, MD Область P-петли Schlafen 3 действует в цитозоле, индуцируя дифференцировку эпителиальных клеток кишечника Caco-2 человека. . Biochim Biophys Acta 1843 , 3029–3037, https: // doi.org / 10.1016 / j.bbamcr.2014.09.017 (2014).

CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

Активация киназы фокальной адгезии сальмонеллой подавляет аутофагию через сигнальный путь Akt / mTOR и способствует выживанию бактерий в макрофагах

Рисунок 3

Активация Akt в ответ на Salmonella требует FAK.

(A) WT и FAK ^{— / —} PEM инкубировали в течение 0–5 часов с ΔinvG Salmonella перед иммуноблоттингом с указанными антителами.(B) WT PEM предварительно обрабатывали в течение 1 часа ингибитором FAK-киназы PF-228 (0,5 мкм) перед инкубацией с ΔinvG Salmonella в течение 5 часов. Лизаты подвергали иммуноблоттингу с указанными антителами. (C – D) Макрофаги WT или FAK ^{— / —} инкубировали либо со штаммом ΔΣΠΙ1ΔΣΠΙ2 (C), либо с шариками, покрытыми LPS (D), в течение 0–5 часов перед иммуноблоттингом с указанными антителами. На панелях C и D WT PEM также инкубировали с ΔinvG (5 ч) для сравнения активации Akt.Вертикальные белые линии на панели D обозначают несмежные полосы, полученные в результате однократной экспозиции. (E) Уровни фосфорилированных белков были количественно определены денситометрией, нормализованы к количеству общего белка, присутствующего в каждом образце, и выражены относительно базального уровня в неинфицированных клетках. Значения представляют собой средние значения ± SEM, N = 3, * p <0,05. Пунктирная линия, нарисованная у 1, указывает базальные уровни активации. (F) PEM дикого типа, экспрессирующие HA-Akt, либо оставляли необработанными, либо инкубировали с ΔinvG Salmonella в течение 5 часов.Лизаты подвергали иммунопреципитации (IP) антителами против НА перед иммуноблоттингом на FAK и HA. Параллельно лизаты подвергали иммуноблоттингу на FAK, HA и ERK1 / 2 для контроля уровня экспрессии. (G) Макрофаги WT и FAK ^{— / —}, экспрессирующие HA-Akt, были окрашены анти-HA и анти-LAMP1 перед анализом с помощью конфокальной микроскопии. Белые прямоугольники показывают увеличенные области на нижней панели. Стрелки указывают на HA + LAMP + Salmonella , обнаруженные в WT PEM. (H) Процент ΔΣΠΙ1ΔΣΠΙ2 (первая группа) или ΔinvG (вторая группа) Salmonella , совместно локализующиеся с HA и LAMP-1 через 5 часов после инфицирования.Было подсчитано не менее 100 бактерий на одно условие. Значения представляют собой средние значения ± SEM, N = 3, * p <0,05.

doi: https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1004159.g003

Эндотелиальный FAK необходим для стабильности сосудистой сети, выживания клеток и формирования ламеллиподов | Журнал клеточной биологии

Морфогенез сосудистой сети требует динамического роста и регрессии сосудов. Чтобы исследовать клеточный механизм, лежащий в основе этого процесса, мы удалили киназу фокальной адгезии (FAK), ключевой медиатор передачи сигналов, в эндотелиальных клетках (ECs) с использованием мышей Tie2-Cre.Направленное истощение FAK происходит эффективно на ранних этапах развития, когда мутанты проявляют отличительную и нерегулярную сосудистую сеть, что приводит к кровотечению и летальному исходу между 10,5 и 11,5 дня эмбриона (e). Капилляры и межкапиллярные пространства в желточных мешках были расширены до появления любых других обнаруживаемых аномалий на e9. 5, и эксплантаты демонстрируют, что дефекты возникли в результате потери FAK, а не из-за органной недостаточности. Покадровая микроскопия, отслеживающая поведение ЭК во время формирования сосудов в эксплантах, не выявила явного снижения пролиферации или миграции, но выявила усиление ретракции и гибели клеток, приводящее к уменьшению роста сосудов и усилению регрессии сосудов.В соответствии с этим фенотипом ECs, происходящие из мутантных эмбрионов, обнаруживают аберрантные ламеллиподиальные расширения, измененный актиновый цитоскелет и неполяризованное движение клеток. Это исследование показывает, что FAK имеет решающее значение для морфогенеза сосудов и регуляции выживаемости и морфологии ЭК.

Морфогенез сосудов мыши начинается в желточном мешке (YS) в эмбриональный день (e) 6.5, когда эндотелиальные клетки (ECs) дифференцируются от мезенхимальных предшественников (ангиобластов) в островках крови внеэмбриональной мезодермы. ЭК впоследствии сливаются в примитивное капиллярное сплетение сотовой формы. Это образование кровеносных сосудов de novo называется васкулогенезом и происходит немного позже в собственно эмбрионе. К ст. E8.5 появляются дорсальная аорта, кардинальные вены и окружающее примитивное сосудистое сплетение. Чтобы собрать зрелую сосудистую сеть, состоящую из иерархии артерий, артериол, капилляров, посткапиллярных венул и вен, примитивная сосудистая сеть подвергается глубокому ремоделированию, начиная с e8.5, включая расширение и регресс сосудов (Haar and Ackerman, 1971; Risau, 1997). ).

Ангиогенез, рост новых капилляров из уже существующих кровеносных сосудов, играет важную роль в расширении сосудов (Yancopoulos et al., 2000; Rossant and Howard, 2002; Carmeliet, 2003). В формировании новых сосудистых сегментов участвуют два механизма. Прорастание ангиогенеза — это расширение новых сосудов из существующих капилляров в бессосудистые ткани. Считается, что миграция концевых клеток приводит к уменьшению контактов между ЭК и клетками, запуская пролиферацию ЭК и образование новых кровеносных сосудов (Ausprunk and Folkman, 1977).Таким образом, миграция и пролиферация EC являются решающими событиями в прорастании ангиогенеза. Инвагинальный ангиогенез — это процесс, при котором новые сосуды образуются за счет вставки и расширения транслюменальных тканевых столбов. Предполагается, что эти процессы не требуют немедленного распространения ЭК; скорее, они зависят от перестройки существующих клеток посредством регуляции миграции и адгезии клеток (Burri and Djonov, 2002).

Сосудистая регрессия, или отсечение, является важным процессом ремоделирования, при котором лишние ЭК или сосудистые сегменты удаляются, чтобы построить эффективную сеть (Risau, 1997).Считается, что лишь небольшая часть кровеносных сосудов, образовавшихся во время эмбрионального развития, остается в зрелом возрасте (Risau and Flamme, 1995). Двумя наиболее яркими примерами регрессии сосудов являются первичные дуги аорты и парные дорсальные аорты, которые существуют только временно у млекопитающих (Moore and Persaud, 2003). Точные морфологические события, а также лежащие в основе клеточные и молекулярные механизмы остаются неясными.

Целевой мутагенез многих сигнальных путей (например,g., VEGF, ангиопоэтин, ephrinB2, Notch или TGF-β) приводит к дефектной примитивной сосудистой сети, подтверждая, что они важны для ремоделирования сосудов (Rossant and Howard, 2002). Однако эти сигнальные пути часто вызывают множество биологических эффектов, и точная клеточная функция и внутриклеточные сигнальные события, которые опосредуют такую функцию внутри ECs, неясны.

FAK представляет собой повсеместно экспрессируемую протеин-тирозинкиназу, которая опосредует интегрин, фактор роста и передачу сигналов механического стресса (Miranti and Brugge, 2002; Parsons, 2003; Schlaepfer et al. , 2004). Локализованный в очаговых адгезиях, он взаимодействует с белками, ассоциированными с интегрином, такими как паксиллин и талин, и вызывает передачу сигналов ниже по течению. Активация FAK посредством фосфорилирования тирозина происходит, когда клетки растут на интегриновых лигандах или стимулируются определенными факторами роста. Важность FAK в морфогенезе сосудов очевидна из-за его обильной экспрессии в сосудистой сети во время критического развития сосудов (Polte et al., 1994). Более того, fak -null эмбриона погибают на e8.5 с множественными дефектами, включая неорганизованную сердечно-сосудистую систему (Ilic et al., 1995). Присутствие ЭК в эмбрионах fak ^— ^/ ^— указывает на то, что отсутствие fak не препятствует дифференцировке ЭК (Ilic et al., 2003). Однако fak -нулевые эмбрионы неспособны формировать сосудистые сети, это указывает на то, что FAK функционирует в последующем ангиогенезе и ремоделировании сосудов.

Эксперименты in vitro также продемонстрировали, что FAK передает ангиогенную передачу сигналов от нескольких путей, включая VEGF и ангиопоэтин-1, и опосредует миграцию, выживаемость и пролиферацию ЭК (Abu-Ghazaleh et al., 2001; Ким и др., 2001; Мару и др., 2001; Ци и Клаэссон-Уэлш, 2001; Орр и Мерфи-Ульрих, 2004 г.). Общеизвестно, что выводы, сделанные в результате экспериментов in vitro, могут не соответствовать результатам in vivo. Например, в ECs, а также в других типах клеток, FAK является критическим для пролиферации клеток in vitro (Gilmore and Romer, 1996; Zhao et al., 1998). Однако никаких изменений в пролиферации клеток не было обнаружено у эмбрионов fak ^{— / —} или у мутантов с условной делецией мозга (Ilic et al., 1995; Beggs et al., 2003), вызывая сомнения в том, важен ли FAK для пролиферации клеток in vivo. Более того, исследования на разных типах клеток показывают дифференциальные эффекты FAK на миграцию клеток. Напр., fak -null фибробласты обнаруживают увеличение фокальных адгезионных контактов и уменьшение миграции клеток (Ilic et al., 1995; Schlaepfer et al., 1999). Однако клетки HeLa, экспрессирующие пониженные уровни FAK за счет короткой ингибирующей РНК, демонстрируют увеличение подвижности клеток (Yano et al., 2004), повышая вероятность того, что FAK может вызывать различные эффекты в разных типах клеток. Таким образом, совершенно необходимо проанализировать роль FAK в специфических клеточных клонах в среде in vivo.

В этом исследовании мы выборочно удалили fak в ECs во время эмбриогенеза мышей и исследовали последующие эффекты на морфогенез сосудов. Мы также отслеживали поведение ЭК с помощью покадровой микроскопии эмбриональных эксплантатов и изолированных первичных ЭК.Наша работа с ее исчерпывающими доказательствами in vivo и in vitro демонстрирует, что fak в ЭК требуется для поддержания сосудов и что его удаление серьезно подрывает выживаемость и распространение ЭК, что приводит к сосудистой регрессии.

Чтобы удалить fak в ЭК, мы создали специфичных для сосудов Cre мышей с использованием промотора / энхансера Tie2 (Schlaeger et al., 1997).Для скрининга и характеристики мышей мы использовали репортерных мышей Z / AP или Rosa26R, у которых активность AP или β-галактозидазы, соответственно, активируется только после Cre-опосредованной рекомбинации (Lobe et al., 1999; Mao et al., 1999). Из девяти линий-основателей мы выбрали тот, который эффективно опосредовал удаление гена. Cre был активен на e7.5 в кровяных островках внеэмбриональной мезодермы (Fig. 1 A), самых ранних сосудистых клетках и в дорсальной аорте на e8.5 (Fig. 1 B). На ст. E11.5 Cre был активен во всех исследованных сосудах, включая желточные сосуды (рис.1 В). Гистологическая оценка показала, что Cre был активен в ЭК вместе с некоторыми клетками крови (рис. 1 D). Эти результаты продемонстрировали, что Cre-опосредованное вырезание гена происходит специфически в ранних клетках-предшественниках сосудов, дифференцированных EC и некоторых гематопоэтических клетках.

Используя эту линию Cre, мы создали условные мутанты (в данном исследовании называемые мутантами) Tie2-Cre; фак ^{flox / flox} и Tie2-Cre; фак ^{flox / —}.Однопометники, у которых отсутствовал какой-либо из требуемых аллелей, использовали в качестве контроля на протяжении всего исследования. В аллеле fak ^flox два сайта loxP фланкируют экзон, кодирующий второй домен киназы, что приводит к устранению экспрессии белка FAK, но не влияет на экспрессию FAK-связанной неркиназы (FRNK; Beggs et al., 2003). ). Чтобы проверить удаление аллеля fak ^flox и отсутствие экспрессии FAK в ЭК, мы окрашивали клетки, выделенные из эмбрионов, поскольку идентификация in situ fak -пустых ЭК была скрыта соседними периваскулярными клетками, все еще экспрессирующими FAK.Мы выполнили двойное окрашивание анти-P-Y397FAK (Sieg et al., 2000) и анти-CD31 (маркер EC; Newman et al. , 1990). FAK присутствовал в контактах фокальной адгезии как CD31 ⁺, так и CD31 ^— клеток (рис. 1 E). Хотя не-ЭК от мутанта все еще экспрессировали FAK, большинство клеток CD31 ⁺ от мутанта не экспрессировали FAK (фиг. 1 F). Чтобы оценить динамику истощения FAK, опосредованного Tie2-Cre , мы количественно проанализировали экспрессию эндотелиального FAK на разных стадиях гестации.FAK отсутствовал в ~ 70% ЭК при е8,5, ~ 90% при е9,5 и ~ 95% при е10,5 (рис. 1 G). Таким образом, опосредованная Tie2-Cre делеция fak ^flox началась до e8.5 и привела к почти полному истощению белка FAK в клетках CD31 ⁺ к e10.5.

Чтобы проверить потерю экспрессии FAK, мы выполнили двойное иммуноокрашивание антителами (Abs), специфичными к COOH-концу FAK и CD31 в очищенных ECs из e9.5 эмбрионов и обнаружили аналогичную делецию FAK (рис. 1, E′ – G). Кроме того, используя это Ab, мы исследовали лизаты эмбрионов e9.5 методом вестерн-блоттинга. Несмотря на присутствие других типов клеток, мы обнаружили значительное снижение экспрессии FAK в мутанте (рис. 1 H), что дополнительно подтвердило эффективность делеции fak . Экспрессия FRNK была низкой, не определялась вестерн-блоттингом (неопубликованные данные) и не изменялась при иммунопреципитации (IP; фиг. 1 H).

Напротив, экспрессия Pyk2 (богатая пролином тирозинкиназа 2), FAK-родственной киназы, не изменилась в эмбриональных лизатах (рис.1 H). Мы также выполнили тройное иммуноокрашивание с антителами к CD31, FAK и Pyk2 и не обнаружили явного увеличения сигнала Pyk2 в мутантных ЭК без FAK (рис. S1, доступный по адресу http://www.jcb.org/cgi/content/full/). jcb.200506184 / DC1).

Поскольку FAK удаляется на раннем этапе развития, мы предсказали, что наши мутанты умрут на ранних сроках беременности от летальных сосудистых дефектов. Однако на ст. E9,5 не наблюдалось никаких обнаруживаемых грубых отклонений (таблица I и неопубликованные данные).На e10.5 ~ 10% мутантов были мертвы, а оставшиеся живые мутанты были легко идентифицированы по серьезным сосудистым дефектам. На этапе e11.5 живых мутантных эмбрионов не было обнаружено (таблица I).

Для более точного определения эмбрионального фенотипа мы исследовали мутантные эмбрионы на e10.5. У мутантных YS отсутствовало заполненное кровью сосудистое дерево, обычно наблюдаемое в контроле. Вместо этого кровоизлияние было очевидно как в амниотической полости, так и в полостях ЖС (рис.2 А). Хотя основные структуры присутствовали в собственно эмбрионе, мутанты были немного меньше и демонстрировали участки секвестрированной крови (отражающие расширенные сосуды) главным образом в верхней части туловища и в областях головы (Fig. 2 B).

Чтобы исследовать любые эндотелиальные аномалии, мы выполнили иммуноокрашивание целиком с использованием анти-CD31 и обнаружили многочисленные ЭК CD31 ⁺, организованные в сильно дефектных сосудистых структурах. У мутантных YSs отсутствует иерархический паттерн желточных сосудов, наблюдаемый в контроле (Fig. 2 C), и наблюдаются только остатки крупных сосудов (Fig. 2 D). Мутантным капиллярным сплетениям не хватало сложной сетевой структуры, наблюдаемой в контроле; вместо этого микрососуды имели неправильную форму, часто расширялись и уплощались, имели пластинчатый вид и тонкие колючие соединения (рис. 2 D и не изображены). Мы наблюдали отчетливую внутреннюю сонную артерию, которая была хорошо связана с гомогенной сетью головных капиллярных сплетений в контроле (рис.2 E), но не у мутантов. Вместо этого, как у мутанта YS, сосуды выглядят плоскими и сливаются с окружающими расширенными и синусоидальными капиллярами, что приводит к большим вариациям в размере капилляров и межкапиллярных пространств (Fig. 2 F).

Поскольку основные сосуды были серьезно повреждены на e10.5, мы задались вопросом, никогда ли они не развивались или дегенерировали. Чтобы различать эти возможности, мы проанализировали сосудистую сеть на e9.5 путем двойного иммуноокрашивания на CD31 и α-актин гладких мышц (SMαA). На этапе e9.5 мутантные эмбрионы были морфологически неотличимы от контроля при рассмотрении под препарирующим микроскопом (неопубликованные данные). Внешний вид мутантной сосудистой сети YS был удивительно подобен таковому у контролей, со сравнимыми паттернами ветвления и привлечением гладкомышечных клеток, за исключением того, что желточные артерии были немного менее развитыми (фиг. 4, A и B). Окрашивание на SMαA показало, что гладкомышечные клетки рекрутировались в желточные артерии как в контроле, так и у мутантов (рис.4, В и Г).

В собственно эмбрионе e9.5 двойное окрашивание CD31 и SMαA не выявило явных различий между головной сосудистой сетью мутантов и контролей (неопубликованные данные). Кроме того, основные эмбриональные сосуды (включая дорсальную аорту, дуги аорты и сердечные вены) и камеры сердца у мутантов развивались сравнительно (Рис. 4, E и F). Для дальнейшей проверки этих результатов и исследования сосудов, которые не были видны на поверхности, мы проанализировали поперечные срезы CD31-окрашенных эмбрионов толщиной 100 мкм (рис.4, G и H), снова обнаружив, что дорсальная аорта и кардинальные вены были сопоставимы. Однако мы заметили меньше мелких сосудов в поперечном сечении мутанта (Рис. 4 H), что позволяет предположить, что сосудистые дефекты начали развиваться.

Учитывая, что Cre также экспрессируется в гемопоэтических клетках у мышей Tie2-Cre , мы искали дефекты в клетках крови. При макроскопическом исследовании кровь присутствовала у мутантных эмбрионов e9.5 и YS, как и в контроле.Кроме того, мы выделили циркулирующие кроветворные клетки e9.5 и не обнаружили существенной разницы в количестве клеток, выделенных из контроля и мутантов (неопубликованные данные). Этот результат позволяет предположить, что на данном этапе не было явных нарушений кроветворения. В целом, эти фенотипические находки на e9.5 указывают на то, что начали развиваться тонкие сосудистые дефекты и что они являются первичными эффектами потери FAK в ECs.

Чтобы идентифицировать клеточные дефекты во время развития сосудов, мы сосредоточились на хорошо воспроизводимых нерегулярных размерах микрососудов, наблюдаемых на е10.5 мутантных YS. Для дальнейшего изучения этого фенотипа и во избежание каких-либо вторичных эффектов, которые могли ему способствовать, мы исследовали мутанты на e9.5 перед другими обнаруживаемыми аномалиями. Микроангиограммы мутантных YS с большим увеличением показали более широкий диаметр капилляров, меньшее количество мелких межкапиллярных пространств и большие межкапиллярные области, которые часто были связаны с неполными сосудистыми отростками (рис. 5, A и B). Чтобы подтвердить эти наблюдения количественно, мы проанализировали микроангиографы YS морфометрически. У мутантных YS ширина мутантных капилляров увеличилась на 10 мкм (25%), что сопровождалось уменьшением количества межкапиллярных областей менее 200 мкм ² и увеличением количества межкапиллярных пространств размером более 2000 мкм ² диаметром (рис. 5, G и H). Точки ветвления, представляющие сложность сети, были значительно уменьшены у мутантов (рис. 5 I).

Чтобы отделить любое влияние сердца, крови или других органов, которые могут вносить вклад в сосудистый фенотип, мы проанализировали морфогенез капилляров в эмбриональных эксплантатах ex vivo.Микроангиография аллантоисных эксплантов (рис. 5, C и D) и эксплантатов парааортальной спланхноплевральной мезодермы (P-Sp) (рис. 5, E и F) выявила сосудистые фенотипы, сходные с фенотипами YSs. Наблюдалось расширение капилляров и межкапиллярных пространств, а также снижение сложности сети. Количественная оценка выявила примерно трехкратное увеличение ширины капилляров, что означает значительное уменьшение межкапиллярных пространств <200 мкм ², увеличение межкапиллярных пространств> 2000 мкм ² и уменьшение количества точек ветвления (рис. .5, J – L). Поскольку фенотипы эксплантов напоминают капиллярные дефекты in vivo, они, вероятно, представляют первичные эффекты делеции fak в ECs.

Чтобы идентифицировать дефекты в развитии сосудов, мы выполнили покадровую микроскопию эксплантатов P-Sp, несущих дополнительный аллель Tie1-GFP , в котором GFP управляется EC-специфическим промотором (Iljin et al., 2002). Поскольку эксплантаты P-Sp были взяты из e8.5–9,5 эмбрионов, большинство ЭК потеряли FAK. Чтобы убедиться, что Cre был активен, мы использовали репортер Rosa26R и подтвердили, что сосудистые сети эксплантов были положительными по активности Cre (неопубликованные данные). Наиболее разительные различия связаны с сокращением сосудов. Контрольные эксплантаты (рис. 6, A и B; и видео 1, доступное по адресу http://www.jcb.org/cgi/content/full/jcb.200506184/DC1) сохранили высокий уровень целостности сети. Напротив, мутантные эксплантаты (рис. 6, C и D; и видео 2) претерпели процесс, в котором ЭК сокращались и группировались друг с другом, в результате чего образовалась нерегулярная сеть, состоящая из более широких и более мелких сосудов, напоминающая сосуды е10. .5 микрососудов YS.

Кроме того, мы проанализировали эндотелиальные отростки и сети в 286 видео и обнаружили очевидное ухудшение состояния сосудов: регрессировали 51,8% мутантных сосудов по сравнению с 30,1% контрольных проростков и 51,1% мутантных сетей регрессировали по сравнению с 18,8% контрольных сетей (Таблица II). Кроме того, рост ростков и сетей был снижен у мутантов (35,1 против 56,3% и 23,9 против 45,9%, соответственно; Таблица II). Вместе эти результаты предполагают, что ECs, лишенные FAK, приводят к уменьшению роста сосудов и усилению регрессии сосудов.

Чтобы определить клеточный механизм сосудистых дефектов, мы проанализировали выживаемость, пролиферацию и миграцию клеток. Мы наблюдали 4240 контрольных и 3895 мутантных ЭК в эксплантатах P-Sp в течение 8 часов с помощью покадровой микроскопии. Процент умирающих клеток у мутантов был более чем вдвое выше, чем в контроле (5,8 против 2,4%; фиг. 7 A). Чтобы проверить, есть ли дифференциальный эффект на кончиках побегов и не кончиках клеток, мы наблюдали за 78 контрольными и 108 мутантными концевыми клетками.Опять же, общий процент умирающих клеток у мутантов был более чем вдвое больше, чем у контролей (21,8 против 8,6%). Чтобы проверить апоптоз ЭК in vivo, мы выполнили TUNEL вместе с окрашиванием CD31 на участках YS, которые содержат меньше типов клеток и позволяют более четко идентифицировать ЭК. Мы обнаружили апоптотические ЭК как в контроле, так и у мутантов (рис. 7 B), но количественный анализ выявил двукратное увеличение апоптотических EC у мутантов (рис. 7 C).

Мы не обнаружили каких-либо значительных изменений пролиферации ЭК в эксплантах (рис. 8 А). Чтобы подтвердить этот результат, мы количественно оценили пролиферацию ЭК in vivo путем инъекции BrdU беременным мышам. Впоследствии клетки были выделены из эмбрионов e9.5. Количество клеток BrdU ⁺ CD31 ⁺ было незначительно, но незначительно уменьшено у мутанта, тогда как количество клеток BrdU ⁺ CD31 ^— осталось прежним (рис. 8 В). Следовательно, потеря fak не вызвала значительного изменения пролиферации ЭК, но снизила выживаемость ЭК, что, вероятно, является ответственной за снижение роста сосудов и усиление регрессии сосудов.

Чтобы исследовать миграцию EC в контексте морфогенеза сосудов, мы исследовали ECs, выстилающие сосуды в эксплантах P-Sp. Мы отслеживали путь миграции ЭК в течение 300-минутного периода с 30-минутными интервалами. Из 13 проанализированных контрольных и 16 мутантных ЭК шесть репрезентативных пар показаны на фиг. 9А, не демонстрируя очевидной разницы. Мы количественно оценили скорость (расстояние / интервал) 33 контрольных и 55 мутантных ЭК, которые были проанализированы в течение 8 часов и нашли среднюю скорость 10.7 ± 8,7 мкм против 12,2 ± 11,56 мкм, соответственно, что указывает на отсутствие существенной разницы в расстоянии миграции мутантных ЭК внутри сосуда и на незначительное, незначительное увеличение скорости.

Поскольку предыдущие сообщения о клеточной миграции FAK-дефицитных клеток анализировались в изолированных клетках, а не в контексте органа (Ilic et al., 1995; Yano et al., 2004), мы исследовали ЭК, которые не принадлежали к структуре сосуда. но были разбросаны в эксплантатах P-Sp.Пути миграции шести репрезентативных пар из 26 контрольных и 34 мутантных EC, проанализированных с 28-минутными интервалами в течение 280-минутного периода, показаны на фиг. 9 B, демонстрируя увеличение клеточной миграции мутантных EC. В соответствии с этим результатом средняя скорость 10 контрольных и 15 мутантных ЭК, проанализированных за 8-часовой период, составила 7,6 ± 6,6 мкм против 16,7 ± 12,8 мкм, соответственно.

Мы также отслеживали (с 10-минутными интервалами в течение 8 часов) миграцию изолированных эмбриональных ЭК, которые были идентифицированы с помощью захвата DiI-Ac-LDL или Tie1-GFP, выращенных на фибронектине (FN).Контрольные ECs обнаруживают обширное взъерошивание мембран и образование ламеллиподий на переднем фронте миграции (Fig. 10 A and Video 3, available at http://www.jcb.org/cgi/content/full/jcb.200506184/DC1). Напротив, мутантные ECs были плохо распределены и лишены взъерошенности мембран и образования ламеллиподий (Fig. 10 B and Video 4). Колючие, тонкие клеточные выступы беспорядочно расширяются по периферии клеток, нарушая полярность клеток. Ни мутантные, ни контрольные кластеры ЭК не мигрировали на значительное расстояние (неопубликованные данные). Одиночные мутантные клетки активно перемещались, хотя им не хватало стабильной направленной миграции, наблюдаемой в контроле. Чтобы количественно оценить миграцию клеток, мы отслеживали клеточный центр и обнаружили, что одиночные мутантные ЭК преодолевали на ~ 50% большие расстояния по сравнению с контролем (неопубликованные данные). Эти результаты демонстрируют, что FAK-дефицитные одиночные ЭК демонстрируют дефектную, но более быструю локомоцию на FN в присутствии сыворотки и добавок для роста.

Для дальнейшей идентификации клеточных дефектов, возникающих в результате истощения FAK в ECs, мы исследовали структуру актинового цитоскелета.Окрашивание фаллоидином выявило типичные актиновые стрессовые волокна во всех контрольных ЭК (фиг. 10С). FAK-дефицитные ECs обнаруживают меньше и аномальных стрессовых волокон, которые вместо этого напоминают кортикальные актиновые пучки (Fig. 10 D). Поскольку fak ^— ^/ ^— фибробласты демонстрируют повышенное количество фокальных адгезионных контактов (Ilic et al., 1995), мы окрашивали наши мутантные ЭК на паксиллин, который является компонентом фокальных адгезионных контактов и якорь для актиновых филаментов.В отличие от обильных, хорошо распределенных фокальных адгезий по всем контрольным клеткам, у мутантов было обнаружено меньше фокальных адгезий, которые были ограничены периферией (даже агрегировались вместе) (Рис. 10, E и F). Эти результаты предполагают, что потеря fak ведет к аномальной структуре актинового цитоскелета и организации фокальной адгезии в ECs.

Чтобы определить кинетику разрастания клеток, мы исследовали клетки на FN и обнаружили заметное снижение распространения клеток как через 2, так и через 20 часов после посева (рис.10 G). Чтобы удостовериться, что это результат, специфичный для матрикса, мы высевали клетки на планшеты, покрытые ламинином (LM) и поли-l-лизином (PLL), и обнаружили аналогичные дефекты в распределении клеток (Fig. 10, H and I). Следовательно, потеря FAK поставила под угрозу распространение EC через как ECM-зависимые, так и независимые механизмы. Таким образом, эти результаты предполагают, что потеря fak приводит к аномальному распространению клеток без уменьшения миграции клеток в ЭК.

Роль FAK в передаче ангиогенных сигналов в ECs была предположена в экспериментах in vitro (Orr and Murphy-Ullrich, 2004).Исследования с использованием нокаута fak также показывают, что fak требуется для ангиогенеза in vivo (Ilic et al., 1995, 2003). Однако, поскольку полная абляция удаляет ген fak во всех клетках, точная функция FAK в ECs in vivo остается неизвестной. Более того, поскольку fak -null эмбрионы являются дефектными в основных процессах развития и умирают на e8.5, неясно, является ли сосудистый эффект FAK вторичным по отношению к влиянию других типов клеток и органов.Мы выборочно нацелены на fak с помощью созданных нами мышей Tie2-Cre. Cre-опосредованная эффективная рекомбинация происходила в сосудистых клетках-предшественниках на e7.5, и FAK удалялся в ~ 90% ECs на e9.5. Специфические сосудистые дефекты развиваются на ст. Ст. 9,5, а 100% летальность наступает на ст. Ст. 11,5. Кроме того, мы идентифицировали аналогичные дефекты в эмбриональных эксплантатах, предполагая, что сосудистые аномалии не являются вторичными по отношению к недостаточности других органов. Таким образом, мы заключаем, что FAK в ECs играет важную роль в раннем сосудистом развитии.

При редактировании этой рукописи Шен и др. (2005) сообщили, что FAK в ECs необходим для позднего, но не раннего эмбриогенеза. Различные штаммы мышей Tie2-Cre, которые использовались, вероятно, происходили из разных сайтов интеграции, и начало активности Cre могло быть различным. Шен и др. (2005) продемонстрировали делецию FAK на e9.5, но неизвестно, какая часть EC потеряла FAK. Если Tie2-Cre в Shen et al.(2005) исследование было менее эффективным в раннем развитии, оно могло объяснить их поздний эмбриональный фенотип. Также были использованы различные floxed аллели fak . Наш floxed аллель нацелен на второй экзон киназы, как в ранее опубликованном аллеле fak -null (Ilic et al., 1995). Шен и др. (2005) использовали флоксированный аллель, нацеленный на третий экзон. Они продемонстрировали, что их нулевой аллель приводит к аналогичной ранней летальности; таким образом, временные различия фенотипа, вероятно, являются результатом различий в эффективности Cre, а эндотелиальный FAK необходим для раннего морфогенеза сосудов.

Общеизвестно, что правильное формирование сосудистых деревьев включает обрезку сосудов для удаления ненужных сосудистых каналов (Risau, 1997). Мало что известно о клеточных и молекулярных механизмах, участвующих в регрессии сосудов. Мы идентифицируем ранее недооцененный молекулярный механизм, опосредованный передачей сигналов FAK в поддержании сосудистых сетей. Основные суда были установлены и хорошо сформированы на e9.5, но к e10.5 практически все основные сосуды у мутантов разрушились. Это могло быть результатом общего состояния эмбрионов. Однако покадровая микроскопия недвусмысленно выявила регресс сосудов в эмбриональных эксплантах, подтверждая мнение о том, что fak обеспечивает выживание и стабилизацию сигналов для ЭК, тем самым поддерживая целостность сосудов.

На основании экспериментов на культуре клеток было предложено, что FAK регулирует множественные эффекты в ЭК, включая миграцию, пролиферацию и выживаемость клеток (Orr and Murphy-Ullrich, 2004; Shen et al., 2005). Сообщения о полном нокауте предполагают, что потеря fak ставит под угрозу миграцию и, таким образом, нарушает ангиогенез (Ilic et al., 1995, 2003). Точная клеточная функция fak в ЭК во время ангиогенеза in vivo еще предстоит выяснить. Мы применили подход условного нокаута в сочетании с визуализацией ангиогенных процессов в реальном времени, демонстрируя выживаемость клеток как глубокий эффект FAK на ЭК in vivo. У эмбрионов fak ^{— / —} не было обнаружено увеличения апоптоза (Ilic et al., 2003). Вероятное несоответствие — это чувствительность обнаружения в полных нокаутах, погибших до пункта e8.5. Мы подсчитали 10 175 контрольных и 7 878 мутантных ЭК YS и обнаружили повышенные ЭК TUNEL ⁺ у мутантов in vivo. Мы также исследовали гибель клеток с помощью покадровой микроскопии и обнаружили увеличение гибели ЭК как на кончиках ростков, так и в существующей сети. Таким образом, наши данные показывают, что потеря FAK может поставить под угрозу выживаемость клеток, что может способствовать ухудшению состояния сосудов, наблюдаемому у мутантных эмбрионов.

Было показано, что множественные сигнальные молекулы влияют на выживание EC. Кадгерин эндотелия сосудов устраняет сигнал выживания от VEGF-A к Akt и Bcl2 (Carmeliet et al., 1999). Киназа Raf опосредует сигналы выживания в ЭК от основного фактора роста фибробластов и VEGF (Alavi et al., 2003). RhoB контролирует трафик Akt и регулирует выживаемость EC в развитии сосудов (Adini et al., 2003). Наша работа демонстрирует, что FAK является сигнальным посредником для выживания EC, предполагая, что он может участвовать в одном или нескольких из этих сигнальных путей.

FAK-нулевых фибробластов, полученных из fak ^— ^/ ^— эмбрионов, демонстрируют пониженную подвижность клеток (Ilic et al., 1995; Schlaepfer et al., 1999). Однако Яно и др. (2004) сообщили, что клетки HeLa, экспрессирующие уменьшенный FAK с помощью короткой ингибирующей РНК и FAK-нулевые фибробласты, демонстрируют повышенную подвижность клеток. Таким образом, роль FAK в миграции клеток остается спорной.С помощью покадровой микроскопии мы обнаружили, что миграция FAK-дефицитных ЭК, выстилающих капилляры эксплантов, неотличима от миграции контрольных клеток. FAK-дефицитные ECs, разбросанные за пределами капилляров в эксплантах, и одиночные EC, выращенные на чашках, покрытых FN, мигрировали быстрее, чем контрольные, хотя они делали это нестабильно и не имели направления. FAK-дефицитные фибробласты также обнаруживают сходную нестабильную случайную миграцию (Wang et al., 2001a). Шен и др. (2005) сообщили о снижении миграции клеток в ответ на ФН при закрытии раны, но не в анализах камеры Бойдена.Однако на оба анализа могут влиять пролиферация и гибель клеток, и поскольку их ЭК демонстрируют сниженную пролиферацию и повышенный апоптоз, миграционный дефект требует дальнейшей проверки. Мы считаем, что культуры органов, используемые в наших исследованиях, являются более физиологически значимыми, и что покадровая микроскопия может оценить миграцию клеток без влияния пролиферации и гибели клеток.

Наши результаты открывают альтернативные возможности относительно функции подвижности FAK и представляют собой концептуальный прогресс, выходящий за рамки идеи о том, что потеря FAK приводит к снижению клеточной подвижности и, таким образом, ставит под угрозу ангиогенез.Интересно, что WAVE2, белок, связанный с синдромом Вискотта-Олдрича, имеет решающее значение для подвижности эндотелия и, по-видимому, имеет сходную, но отличную от FAK функцию. WAVE2 ^{— / —} эмбрионы также умирают около e10,5 из-за сосудистых дефектов. Также были очевидны уменьшенный размер сосудов и увеличенные межсосудистые области, что указывает на типичные прорастающие ангиогенные дефекты. В отличие от мутантов FAK, эксплантаты мутантного P-Sp WAVE2 не смогли вырастить сосудистую сеть, что также свидетельствует о нарушении ангиогенеза прорастания, возможно, из-за нарушения миграции клеток (Yamazaki et al., 2003). Рост через прорастание, хотя и сниженный, происходит у мутанта FAK. Следовательно, потеря FAK не может полностью нарушить миграцию ЭК in vivo. Удивительно, что существует различная подвижность FAK-дефицитных EC внутри или вне сосудистой структуры, это указывает на то, что FAK может по-разному регулировать миграцию EC в различных ангиогенных процессах.

Изменения в морфологии клеток после истощения FAK имеют решающее значение для понимания клеточной функции FAK.Мы продемонстрировали, что FAK-дефицитные ECs распространяются плохо и лишены клеточной полярности и круглых, широких ламеллиподий, вместо этого расширяя множественные указывающие выступы. Актиновый цитоскелет был дезорганизован и содержал уменьшенное количество, возможно, скопления фокальных спаек. Эти морфологические характеристики согласуются с дефектами, наблюдаемыми в первичных эмбриональных фибробластах мышей и клеточных линиях, экспрессирующих пониженные уровни FAK (Yano et al., 2004). Тот факт, что FAK временно локализуется в ламеллиподиях и складках мембран (Hsia et al., 2003) дополнительно поддерживает идею, что это важно для этих клеточных структур. Клеточные дефекты также обеспечивают морфологическое объяснение увеличения гибели клеток в этих клетках, поскольку распространение клеток имеет решающее значение для выживания прикрепленных клеток (Frisch and Screaton, 2001). Нарушенная организация цитоскелета, вероятно, может быть причиной их дефектной адгезии к субстратам и распространения, что может объяснить сокращение, наблюдаемое в эксплантах. Вместе морфологические дефекты, проявляющиеся в FAK-дефицитных ECs, согласуются с поведением дефектных клеток, приводящим к дефектам сосудов.

Мутантные дефекты EC напоминают те, которые наблюдаются в клетках с аномальной передачей сигналов киназой семейства Rho (Hall, 1998). Ретрактильное поведение может быть результатом повышенной активности Rho, тогда как аберрантное ламеллиподиальное выпячивание может быть вызвано сниженной активностью Rac. Окрашивание легкой цепи фосфомиозина, основной мишени для Rho-киназы, не выявило серьезных изменений между мутантными и контрольными EC (неопубликованные данные), предполагая, что активность Rho не может быть затронута.Наша текущая гипотеза состоит в том, что Rac является вероятной мишенью для FAK в ECs, что согласуется с находками в FAK-нулевых фибробластах (Tilghman et al. 2005). Однако минимальное количество ЭК, полученных от эмбрионов e9.5, исключает возможность проведения Вестерн-блоттинга для тщательной проверки этой гипотезы в настоящее время.

Таким образом, наше открытие, что FAK имеет решающее значение для стабильности сосудов во время развития сосудов, предполагает роль FAK в неоваскуляризации заболеваний, таких как рак и ретинопатия, во время которых рост кровеносных сосудов способствует как патогенезу, так и лечению заболеваний.Вполне возможно, что FAK может оказаться многообещающей мишенью для антиангиогенной терапии, поскольку удаление FAK может приводить к регрессии сосудов.

Мечение

BrdU проводили с использованием набора от Zymed Laboratories. BrdU в дозе 100 мкг / г массы тела вводили (в / в) беременным самкам на 9,5-й день беременности за 1 час до сбора эмбрионов. Клетки выделяли, как описано выше, и культивировали в течение 3 часов.BrdU был обнаружен согласно инструкции производителя.

Для исследования апоптотических ЭК, е9,5 YS фиксировали в 4% PFA o / n, заливали при оптимальной температуре резки и замораживали на срезы размером 8 или 10 мкм. Апоптоз ЭК выявляли двойным иммунофлуоресцентным окрашиванием на CD31 и последующим TUNEL с использованием набора для обнаружения апоптоза флуоресцеином in situ (Intergen Company). Подсчитывали ЭК CD31 ⁺ и получали отношения TUNEL ⁺ CD31 ⁺ к общему количеству ЭК CD31 ⁺.Статистический анализ проводился с использованием теста t .

Мы благодарим доктора Дж. М. Бишопа, в лаборатории которого были получены мыши Tie2-Cre ; Доктора К. Ильин и К. Алитало для мышей Tie1-GFP ; Доктор Д. Илич для fak ⁺ ^/ ^— мышей; Доктора Д. Ханахан, З. Верб, Д. Шепард, Т. Карлсону за критическое прочтение рукописи; ДокторА. Сарверу за помощь в подготовке рукописи; Доктора К. Дамски, Д. Илича и сотрудников нашей лаборатории за полезные обсуждения; М. Лам за модифицированный протокол аллантоисных эксплантатов; и Центр печеночного центра UCSF при поддержке гранта Национального института здоровья (NIH) (P30-DK26743) на гистологию.

Эта работа поддержана стартовыми фондами R. Wang из Тихоокеанского института сосудистых исследований и грантом Программы поддержки биомедицинских исследований Медицинского института Говарда Хьюза, грантами NIH J.М. Бишоп (CA 44338) и Р. Ван (HL075033), а также Фонд Джорджа Уильямса Хупера.

Сокращения, использованные в этой статье: Ab, антитело; ЭК, эндотелиальная клетка; ФН, фибронектин; FRNK, некиназа, связанная с FAK; IP, иммунопреципитация; ЛМ, ламинин; NE, нейроэпителий; о / н, ночлег; PLL, поли-L-лизин; P-Sp, парааортальная спланхноплевральная мезодерма; SMαA, α-актин гладких мышц; Tg, трансгенный; Ю.С., желточный мешок.

Глобальное подавление фейковых новостей вызывает опасения по поводу цензуры | Социальные сети

В мире, где ложная и вводящая в заблуждение информация мгновенно достигает миллиардов, а онлайн-манипуляции становятся все более изощренными, правительства все чаще обращаются к законодательству для борьбы с поддельными новостями.

Но, в отличие, скажем, от языка вражды, пропаганды терроризма или детской порнографии, фейковые новости — это сложная область для закона: в целом они не были незаконными, а в демократических странах политические высказывания считаются заслуживающими самой сильной свободы слова. защиты.

Юристы, технологические эксперты, представители СМИ и борцы за свободу слова выразили опасения, что поспешно разработанные внутренние меры, запрещающие фальшивые новости, могут в лучшем случае оказаться неэффективными, а в худшем — контрпродуктивными.

«Слишком часто законодательство фокусируется на деревьях, а не на лесу», — сказал Альберто Алеманно, профессор права ЕС.«Вполне вероятно, что в конечном итоге это окажется неактуальным или даже усугубит первопричины феномена фейковых новостей».

Создавать и распространять фейковые новости намного проще и дешевле, чем когда-либо прежде. Фальшивые новости также являются «низко висящим фруктом» для политиков, сказал Алеманно: «Они могут говорить об этом с избирателями, одновременно устраняя основные структурные причины того, почему они так широко распространены. в нашем обществе и медиа-среде намного, намного сложнее ».

От Европы до Азии лидеры спешат принять законы о борьбе с фейковыми новостями.Франция, где «фальшивые новости», обязательно узко определяемые с целью защиты свободы слова, запрещены с 1881 года, стремится позволить судьям распоряжаться об удалении фальшивого онлайн-контента в период выборов.

Закон также обяжет платформы социальных сетей называть рекламодателей, которые финансируют контент, и сообщить, сколько они платят, и разрешить независимому вещательному органу Франции приостановить деятельность СМИ, которые рассматриваются как попытки дестабилизировать голосование, особенно если они «находятся под влиянием иностранцев». .

Германия в начале этого года также ввела в действие закон о разжигании ненависти в Интернете, предоставив платформам с более чем 2 миллионами пользователей 24 часа для удаления «явно незаконного» террористического контента, расистских материалов и фейковых новостей или наложения штрафов в размере до 50 миллионов евро (44 миллиона фунтов стерлингов). . Другие оскорбительные материалы должны быть заблокированы в течение семи дней.

Другие страны ЕС, включая Швецию, Ирландию и Чешскую Республику, взвешивают или вводят в действие законы о борьбе с фейковыми новостями. Но, как предупреждают участники кампании, такие законы могут ограничить свободу слова или привести к непреднамеренной цензуре, режимы, часто очень чувствительные к критике СМИ, обвиняются в использовании аналогичного законодательства, чтобы попытаться заставить замолчать свободу слова и оппозиционные группы.

Критиковали за организацию «прямой атаки на господствующую журналистику», Индия в прошлом месяце внезапно отозвала, через 24 часа после его обнародования, радикальный новый приказ, позволяющий отстранить любого журналиста, подозреваемого в распространении фальшивых новостей (что было не определил).

Но Малайзия приняла закон, устанавливающий штрафы в размере до 88 000 фунтов стерлингов и тюремное заключение сроком до шести лет для преступников, которые используют традиционные средства массовой информации, цифровые публикации и социальные сети, в том числе за пределами Малайзии, для распространения фейковых новостей.Оппоненты заявляют, что закон приближает страну «на шаг к диктатуре».

В Таиланде также действует закон о кибербезопасности, согласно которому распространение ложной информации подлежит тюремному заключению на срок до семи лет, в то время как Сингапур готовит отчет о мерах по борьбе с «преднамеренной ложью в Интернете», а Филиппины обдумывают меры по борьбе с подделкой новостное законодательство, предусматривающее наказание преступников тюремным заключением на срок до 20 лет.

Помимо законодательства, меры гражданского общества, которые все чаще принимаются для борьбы с фальшивыми новостями, включая проверку фактов и разоблачение, также могут в конечном итоге оказаться неэффективными, сказал Алеманно.«Проблема здесь просто в том, что проверяющие факты не вмешиваются до публикации, а к тому времени уже слишком поздно».

Лиза-Мария Нойдерт из Оксфордского института Интернета, специализирующаяся на противодействии компьютерной пропаганде, согласилась: «Будет ли история, проверенная фактами, просто улучшать узнаваемость оригинала? Увидят ли его те же люди? В это поверит? Есть проблема с доверием. Люди не обязательно верят основным СМИ и политическим элитам ».

Вместе с партнерами организация Reporter sans Frontières, следящая за свободой СМИ, запустила Инициативу доверия журналистам, возможную будущую систему сертификации, которая будет способствовать строгой и надежной журналистике через стандарты, охватывающие вопросы прозрачности и доверия, такие как право собственности, независимость, источники доходов, журналистские методы и т. Д. соблюдение этических норм.

«Две когда-то отдельные арены — СМИ и общественные дебаты — слились и изменились», — сказал директор RSF Кристоф Делуар. «Ложная и надежная информация теперь распространяется по одним и тем же каналам, а« плохие »новости распространяются быстрее, чем« хорошие ». Мы должны дать реальное преимущество тем, кто создает надежную журналистику ».

Делуар сказал, что не против «хорошего баланса между саморегулированием и регулированием». Но поскольку ЕС готовится обнародовать план добровольного саморегулирования со стороны интернет-гигантов, таких как Facebook, Twitter и Google, с угрозой соблюдения законов, если они не будут его соблюдать, эксперты сомневаются, что простое требование, чтобы платформы взяли на себя ответственность, — это долгое время. -срочное решение.

«Есть вопросы о времени и ресурсах, которые социальные сети вложат в эту работу, а также о том, обязательно ли они лучшие судьи материала», — сказал Нойдерт. «Во Франции решения будут приниматься судьями в индивидуальном порядке, так что будет, по крайней мере, юридический надзор.

Но, очевидно, есть пробелы, и очень трудно понять, как это будет работать … Распространение существующих законов и определений на онлайн-сферу может быть трудным. И теперь авторитарные режимы могут указать на эти шаги демократии.

Алеманно сказал, что большая часть проблемы связана с бизнес-моделью платформ социальных сетей. «Толчок должен исходить от платформ, но то, как они зарабатывают деньги — повышение вовлеченности читателей и монетизация их данных — означает, что у них нет стимула играть роль арбитров истины», — сказал он.

«Со временем это может измениться. Но вместо предписывающих законов, направленных сверху вниз, мы должны думать об изменении среды, в которой действуют читатели, и расширении их прав и возможностей: отображать связанные статьи, проверенные фактами, рядом с спорными историями; приложения, позволяющие пользователям проверять достоверность; системы сертификации.

Для Наудерта платформы медленно «меняют свое мышление», понимая, что модель оплаты за клик не может быть лучшей гарантией их долгосрочного успеха. «Что нужно больше всего, — сказала она, — это большая прозрачность во всех отношениях. Это социальная, медийная и технологическая проблема. Если указывать пальцем только на одного актера, это не поможет ».

Ложь, рисование линий и (глубокие) фейковые новости

% PDF-1.7 % 1 0 объект > / Метаданные 2 0 R / Контуры 3 0 R / Страницы 4 0 R / StructTreeRoot 5 0 R / Тип / Каталог / ViewerPreferences> >> эндобдж 6 0 obj > эндобдж 2 0 obj > ручей application / pdf

Марк Джонатан Блитц

Ложь, рисование линий и (глубокие) фейковые новости

Князь 12.5 (www.princexml.com) AppendPDF Pro 6.3 Linux 64 бит 30 августа 2019 Библиотека 15.0.4Appligent pdfHarmony 2.02020-03-23T00: 12: 12-07: 002020-03-23T00: 12: 12-07: 002020-03- 23T00: 12: 12-07: 001uuid: 82f8f8b1-adf8-11b2-0a00-203e40020000uuid: 82f91fc0-adf8-11b2-0a00-4048cea4ff7fpdf Harmony 2.0 Linux Kernel 2.6 64bit 13 марта 2012 Библиотека 9.0.1 конечный поток эндобдж 3 0 obj > эндобдж 4 0 obj > эндобдж 5 0 obj > эндобдж 7 0 объект > эндобдж 8 0 объект > эндобдж 9 0 объект > эндобдж 10 0 obj > эндобдж 11 0 объект > эндобдж 12 0 объект > эндобдж 13 0 объект > эндобдж 14 0 объект > эндобдж 15 0 объект > эндобдж 16 0 объект > эндобдж 17 0 объект > эндобдж 18 0 объект > эндобдж 19 0 объект > эндобдж 20 0 объект > эндобдж 21 0 объект > эндобдж 22 0 объект > эндобдж 23 0 объект > эндобдж 24 0 объект > эндобдж 25 0 объект > эндобдж 26 0 объект > эндобдж 27 0 объект > эндобдж 28 0 объект > эндобдж 29 0 объект > эндобдж 30 0 объект > эндобдж 31 0 объект > эндобдж 32 0 объект > эндобдж 33 0 объект > эндобдж 34 0 объект > эндобдж 35 0 объект > эндобдж 36 0 объект > эндобдж 37 0 объект > эндобдж 38 0 объект > эндобдж 39 0 объект > эндобдж 40 0 объект > эндобдж 41 0 объект > эндобдж 42 0 объект > эндобдж 43 0 объект > эндобдж 44 0 объект > эндобдж 45 0 объект > эндобдж 46 0 объект > эндобдж 47 0 объект > эндобдж 48 0 объект > эндобдж 49 0 объект > эндобдж 50 0 объект > эндобдж 51 0 объект > эндобдж 52 0 объект > эндобдж 53 0 объект > эндобдж 54 0 объект > эндобдж 55 0 объект > эндобдж 56 0 объект > эндобдж 57 0 объект > эндобдж 58 0 объект > эндобдж 59 0 объект > эндобдж 60 0 объект > эндобдж 61 0 объект > эндобдж 62 0 объект > эндобдж 63 0 объект > эндобдж 64 0 объект > эндобдж 65 0 объект > эндобдж 66 0 объект > эндобдж 67 0 объект > эндобдж 68 0 объект > эндобдж 69 0 объект > эндобдж 70 0 объект > эндобдж 71 0 объект > эндобдж 72 0 объект > эндобдж 73 0 объект > эндобдж 74 0 объект > эндобдж 75 0 объект > эндобдж 76 0 объект > эндобдж 77 0 объект > эндобдж 78 0 объект > эндобдж 79 0 объект > эндобдж 80 0 объект > эндобдж 81 0 объект > эндобдж 82 0 объект > эндобдж 83 0 объект > эндобдж 84 0 объект > эндобдж 85 0 объект > эндобдж 86 0 объект > эндобдж 87 0 объект > эндобдж 88 0 объект > эндобдж 89 0 объект > эндобдж 90 0 объект > эндобдж 91 0 объект > эндобдж 92 0 объект > эндобдж 93 0 объект > эндобдж 94 0 объект > эндобдж 95 0 объект > эндобдж 96 0 объект > эндобдж 97 0 объект > эндобдж 98 0 объект > эндобдж 99 0 объект > эндобдж 100 0 объект > эндобдж 101 0 объект > эндобдж 102 0 объект > эндобдж 103 0 объект > эндобдж 104 0 объект > эндобдж 105 0 объект > эндобдж 106 0 объект > эндобдж 107 0 объект > эндобдж 108 0 объект > эндобдж 109 0 объект > эндобдж 110 0 объект > эндобдж 111 0 объект > эндобдж 112 0 объект > эндобдж 113 0 объект > эндобдж 114 0 объект > эндобдж 115 0 объект > эндобдж 116 0 объект > эндобдж 117 0 объект > эндобдж 118 0 объект > эндобдж 119 0 объект > эндобдж 120 0 объект > эндобдж 121 0 объект > эндобдж 122 0 объект > эндобдж 123 0 объект > эндобдж 124 0 объект > эндобдж 125 0 объект > эндобдж 126 0 объект > эндобдж 127 0 объект > эндобдж 128 0 объект > эндобдж 129 0 объект > эндобдж 130 0 объект > эндобдж 131 0 объект > эндобдж 132 0 объект > эндобдж 133 0 объект > эндобдж 134 0 объект > эндобдж 135 0 объект > эндобдж 136 0 объект > эндобдж 137 0 объект > эндобдж 138 0 объект > эндобдж 139 0 объект > эндобдж 140 0 объект > эндобдж 141 0 объект > эндобдж 142 0 объект > эндобдж 143 0 объект > эндобдж 144 0 объект > эндобдж 145 0 объект > эндобдж 146 0 объект > эндобдж 147 0 объект > эндобдж 148 0 объект > эндобдж 149 0 объект > эндобдж 150 0 объект > эндобдж 151 0 объект > эндобдж 152 0 объект > эндобдж 153 0 объект > эндобдж 154 0 объект > эндобдж 155 0 объект > эндобдж 156 0 объект > эндобдж 157 0 объект > эндобдж 158 0 объект > эндобдж 159 0 объект > эндобдж 160 0 объект > эндобдж 161 0 объект > эндобдж 162 0 объект > эндобдж 163 0 объект > эндобдж 164 0 объект > эндобдж 165 0 объект > эндобдж 166 0 объект > эндобдж 167 0 объект > эндобдж 168 0 объект > эндобдж 169 0 объект > эндобдж 170 0 объект > эндобдж 171 0 объект > эндобдж 172 0 объект > эндобдж 173 0 объект > эндобдж 174 0 объект > эндобдж 175 0 объект > эндобдж 176 0 объект > эндобдж 177 0 объект > эндобдж 178 0 объект > эндобдж 179 0 объект > эндобдж 180 0 объект > эндобдж 181 0 объект > эндобдж 182 0 объект > эндобдж 183 0 объект > эндобдж 184 0 объект > эндобдж 185 0 объект > эндобдж 186 0 объект > эндобдж 187 0 объект > эндобдж 188 0 объект > эндобдж 189 0 объект > эндобдж 190 0 объект > эндобдж 191 0 объект > эндобдж 192 0 объект > эндобдж 193 0 объект > эндобдж 194 0 объект > эндобдж 195 0 объект > эндобдж 196 0 объект > эндобдж 197 0 объект > эндобдж 198 0 объект > эндобдж 199 0 объект > эндобдж 200 0 объект > эндобдж 201 0 объект > эндобдж 202 0 объект > эндобдж 203 0 объект > эндобдж 204 0 объект > эндобдж 205 0 объект > эндобдж 206 0 объект > эндобдж 207 0 объект > эндобдж 208 0 объект > эндобдж 209 0 объект > эндобдж 210 0 объект > эндобдж 211 0 объект > эндобдж 212 0 объект > эндобдж 213 0 объект > эндобдж 214 0 объект > эндобдж 215 0 объект > эндобдж 216 0 объект > эндобдж 217 0 объект > эндобдж 218 0 объект > эндобдж 219 0 объект > эндобдж 220 0 объект > эндобдж 221 0 объект > эндобдж 222 0 объект > эндобдж 223 0 объект > эндобдж 224 0 объект > эндобдж 225 0 объект > эндобдж 226 0 объект > эндобдж 227 0 объект > эндобдж 228 0 объект > эндобдж 229 0 объект > эндобдж 230 0 объект > эндобдж 231 0 объект > эндобдж 232 0 объект > эндобдж 233 0 объект > эндобдж 234 0 объект > эндобдж 235 0 объект > эндобдж 236 0 объект > эндобдж 237 0 объект > эндобдж 238 0 объект > эндобдж 239 0 объект > эндобдж 240 0 объект > эндобдж 241 0 объект > эндобдж 242 0 объект > эндобдж 243 0 объект > эндобдж 244 0 объект > эндобдж 245 0 объект > эндобдж 246 0 объект > эндобдж 247 0 объект > эндобдж 248 0 объект > эндобдж 249 0 объект > эндобдж 250 0 объект > эндобдж 251 0 объект > эндобдж 252 0 объект > эндобдж 253 0 объект > эндобдж 254 0 объект > эндобдж 255 0 объект > эндобдж 256 0 объект > эндобдж 257 0 объект > эндобдж 258 0 объект > эндобдж 259 0 объект > эндобдж 260 0 объект > эндобдж 261 0 объект > эндобдж 262 0 объект > эндобдж 263 0 объект > эндобдж 264 0 объект > эндобдж 265 0 объект > эндобдж 266 0 объект > эндобдж 267 0 объект > эндобдж 268 0 объект > эндобдж 269 0 объект > эндобдж 270 0 объект > эндобдж 271 0 объект > / MediaBox [0 0 612 792] / Родительская 274 0 R / Ресурсы> / Шрифт> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / XObject> >> / Повернуть 0 / StructParents 0 / Вкладки / S / Тип / Страница >> эндобдж 272 0 объект > эндобдж 273 0 объект > эндобдж 274 0 объект > эндобдж 275 0 объект > эндобдж 276 0 объект > эндобдж 277 0 объект > эндобдж 278 0 объект > эндобдж 279 0 объект > эндобдж 280 0 объект > эндобдж 281 0 объект > эндобдж 282 0 объект > эндобдж 283 0 объект > эндобдж 284 0 объект > эндобдж 285 0 объект > эндобдж 286 0 объект > эндобдж 287 0 объект > эндобдж 288 0 объект > эндобдж 289 0 объект > эндобдж 290 0 объект > эндобдж 291 0 объект > эндобдж 292 0 объект > эндобдж 293 0 объект > эндобдж 294 0 объект > эндобдж 295 0 объект > эндобдж 296 0 объект > эндобдж 297 0 объект > эндобдж 298 0 объект > эндобдж 299 0 объект > эндобдж 300 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / StructParents 11 / Тип / Страница >> эндобдж 301 0 объект > эндобдж 302 0 объект > эндобдж 303 0 объект > эндобдж 304 0 объект > эндобдж 305 0 объект > эндобдж 306 0 объект > эндобдж 307 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / StructParents 12 / Тип / Страница >> эндобдж 308 0 объект > эндобдж 309 0 объект > эндобдж 310 0 объект > эндобдж 311 0 объект > эндобдж 312 0 объект > эндобдж 313 0 объект > эндобдж 314 0 объект > эндобдж 315 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / StructParents 13 / Тип / Страница >> эндобдж 316 0 объект > эндобдж 317 0 объект > эндобдж 318 0 объект > эндобдж 319 0 объект > эндобдж 320 0 объект > эндобдж 321 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / StructParents 14 / Тип / Страница >> эндобдж 322 0 объект > эндобдж 323 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / StructParents 15 / Тип / Страница >> эндобдж 324 0 объект > эндобдж 325 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / StructParents 16 / Тип / Страница >> эндобдж 326 0 объект > эндобдж 327 0 объект > эндобдж 328 0 объект > эндобдж 329 0 объект > эндобдж 330 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / StructParents 17 / Тип / Страница >> эндобдж 331 0 объект > эндобдж 332 0 объект > эндобдж 333 0 объект > эндобдж 334 0 объект > эндобдж 335 0 объект > эндобдж 336 0 объект > эндобдж 337 0 объект > эндобдж 338 0 объект > эндобдж 339 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / StructParents 18 / Тип / Страница >> эндобдж 340 0 объект > эндобдж 341 0 объект > эндобдж 342 0 объект > эндобдж 343 0 объект > эндобдж 344 0 объект > эндобдж 345 0 объект > эндобдж 346 0 объект > эндобдж 347 0 объект > эндобдж 348 0 объект > эндобдж 349 0 объект > эндобдж 350 0 объект > эндобдж 351 0 объект > эндобдж 352 0 объект > эндобдж 353 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / StructParents 19 / Тип / Страница >> эндобдж 354 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / StructParents 20 / Тип / Страница >> эндобдж 355 0 объект > эндобдж 356 0 объект > эндобдж 357 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / StructParents 21 / Тип / Страница >> эндобдж 358 0 объект > эндобдж 359 0 объект > эндобдж 360 0 объект > эндобдж 361 0 объект > эндобдж 362 0 объект > эндобдж 363 0 объект > эндобдж 364 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / StructParents 22 / Тип / Страница >> эндобдж 365 0 объект > эндобдж 366 0 объект > эндобдж 367 0 объект > эндобдж 368 0 объект > эндобдж 369 0 объект > эндобдж 370 0 объект > эндобдж 371 0 объект > эндобдж 372 0 объект > эндобдж 373 0 объект > эндобдж 374 0 объект > эндобдж 375 0 объект > эндобдж 376 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / StructParents 23 / Тип / Страница >> эндобдж 377 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / StructParents 24 / Тип / Страница >> эндобдж 378 0 объект > эндобдж 379 0 объект > эндобдж 380 0 объект > эндобдж 381 0 объект > эндобдж 382 0 объект > эндобдж 383 0 объект > эндобдж 384 0 объект > эндобдж 385 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / StructParents 25 / Тип / Страница >> эндобдж 386 0 объект > эндобдж 387 0 объект > эндобдж 388 0 объект > эндобдж 389 0 объект > эндобдж 390 0 объект > эндобдж 391 0 объект > эндобдж 392 0 объект > эндобдж 393 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / StructParents 26 / Тип / Страница >> эндобдж 394 0 объект > эндобдж 395 0 объект > эндобдж 396 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / StructParents 27 / Тип / Страница >> эндобдж 397 0 объект > эндобдж 398 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / StructParents 28 / Тип / Страница >> эндобдж 399 0 объект > эндобдж 400 0 объект > эндобдж 401 0 объект > эндобдж 402 0 объект > эндобдж 403 0 объект > эндобдж 404 0 объект > эндобдж 405 0 объект > эндобдж 406 0 объект > эндобдж 407 0 объект > эндобдж 408 0 объект > эндобдж 409 0 объект > эндобдж 410 0 объект > эндобдж 411 0 объект > эндобдж 412 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / StructParents 29 / Тип / Страница >> эндобдж 413 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / StructParents 30 / Тип / Страница >> эндобдж 414 0 объект > эндобдж 415 0 объект > эндобдж 416 0 объект > эндобдж 417 0 объект > эндобдж 418 0 объект > эндобдж 419 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / StructParents 31 / Тип / Страница >> эндобдж 420 0 объект > эндобдж 421 0 объект > эндобдж 422 0 объект > эндобдж 423 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / StructParents 32 / Тип / Страница >> эндобдж 424 0 объект > эндобдж 425 0 объект > эндобдж 426 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / StructParents 33 / Тип / Страница >> эндобдж 427 0 объект > эндобдж 428 0 объект > эндобдж 429 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / StructParents 34 / Тип / Страница >> эндобдж 430 0 объект > эндобдж 431 0 объект > эндобдж 432 0 объект > эндобдж 433 0 объект > эндобдж 434 0 объект > эндобдж 435 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / StructParents 35 / Тип / Страница >> эндобдж 436 0 объект > эндобдж 437 0 объект > эндобдж 438 0 объект > эндобдж 439 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / StructParents 36 / Тип / Страница >> эндобдж 440 0 объект > эндобдж 441 0 объект > эндобдж 442 0 объект > эндобдж 443 0 объект > эндобдж 444 0 объект > эндобдж 445 0 объект > эндобдж 446 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / StructParents 37 / Тип / Страница >> эндобдж 447 0 объект > эндобдж 448 0 объект > эндобдж 449 0 объект > эндобдж 450 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / StructParents 38 / Тип / Страница >> эндобдж 451 0 объект > эндобдж 452 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / StructParents 39 / Тип / Страница >> эндобдж 453 0 объект > эндобдж 454 0 объект > эндобдж 455 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / StructParents 40 / Тип / Страница >> эндобдж 456 0 объект > эндобдж 457 0 объект > эндобдж 458 0 объект > эндобдж 459 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / StructParents 41 / Тип / Страница >> эндобдж 460 0 объект > эндобдж 461 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / StructParents 42 / Тип / Страница >> эндобдж 462 0 объект > эндобдж 463 0 объект > эндобдж 464 0 объект > эндобдж 465 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / StructParents 43 / Тип / Страница >> эндобдж 466 0 объект > эндобдж 467 0 объект > эндобдж 468 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / StructParents 44 / Тип / Страница >> эндобдж 469 0 объект > эндобдж 470 0 объект > эндобдж 471 0 объект > эндобдж 472 0 объект > эндобдж 473 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / StructParents 45 / Тип / Страница >> эндобдж 474 0 объект > эндобдж 475 0 объект > эндобдж 476 0 объект > эндобдж 477 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / StructParents 46 / Тип / Страница >> эндобдж 478 0 объект > эндобдж 479 0 объект > эндобдж 480 0 объект > эндобдж 481 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / StructParents 47 / Тип / Страница >> эндобдж 482 0 объект > эндобдж 483 0 объект > эндобдж 484 0 объект > эндобдж 485 0 объект > эндобдж 486 0 объект > эндобдж 487 0 объект > эндобдж 488 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / StructParents 48 / Тип / Страница >> эндобдж 489 0 объект > эндобдж 490 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / StructParents 49 / Тип / Страница >> эндобдж 491 0 объект > эндобдж 492 0 объект > эндобдж 493 0 объект > эндобдж 494 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / StructParents 50 / Тип / Страница >> эндобдж 495 0 объект > эндобдж 496 0 объект > эндобдж 497 0 объект > эндобдж 498 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / StructParents 51 / Тип / Страница >> эндобдж 499 0 объект > эндобдж 500 0 объект > эндобдж 501 0 объект > эндобдж 502 0 объект > эндобдж 503 0 объект > эндобдж 504 0 объект > эндобдж 505 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / StructParents 52 / Тип / Страница >> эндобдж 506 0 объект > эндобдж 507 0 объект > эндобдж 508 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / StructParents 53 / Тип / Страница >> эндобдж 509 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / StructParents 54 / Тип / Страница >> эндобдж 510 0 объект > эндобдж 511 0 объект > эндобдж 512 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / StructParents 55 / Тип / Страница >> эндобдж 513 0 объект > эндобдж 514 0 объект > эндобдж 515 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / StructParents 56 / Тип / Страница >> эндобдж 516 0 объект > эндобдж 517 0 объект > эндобдж 518 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / StructParents 57 / Тип / Страница >> эндобдж 519 0 объект > эндобдж 520 0 объект > эндобдж 521 0 объект > эндобдж 522 0 объект > эндобдж 523 0 объект > эндобдж 524 0 объект > эндобдж 525 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / StructParents 58 / Тип / Страница >> эндобдж 526 0 объект > эндобдж 527 0 объект > эндобдж 528 0 объект > эндобдж 529 0 объект > эндобдж 530 0 объект > эндобдж 531 0 объект > эндобдж 532 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / StructParents 59 / Тип / Страница >> эндобдж 533 0 объект > эндобдж 534 0 объект > эндобдж 535 0 объект > эндобдж 536 0 объект > эндобдж 537 0 объект > эндобдж 538 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / StructParents 60 / Тип / Страница >> эндобдж 539 0 объект > эндобдж 540 0 объект > эндобдж 541 0 объект > эндобдж 542 0 объект > эндобдж 543 0 объект > эндобдж 544 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / StructParents 61 / Тип / Страница >> эндобдж 545 0 объект > эндобдж 546 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / StructParents 62 / Тип / Страница >> эндобдж 547 0 объект > эндобдж 548 0 объект > эндобдж 549 0 объект > эндобдж 550 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / StructParents 63 / Тип / Страница >> эндобдж 551 0 объект > эндобдж 552 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / StructParents 64 / Тип / Страница >> эндобдж 553 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / StructParents 65 / Тип / Страница >> эндобдж 554 0 объект > эндобдж 555 0 объект > эндобдж 556 0 объект > эндобдж 557 0 объект > эндобдж 558 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / StructParents 66 / Тип / Страница >> эндобдж 559 0 объект > эндобдж 560 0 объект > эндобдж 561 0 объект > эндобдж 562 0 объект > эндобдж 563 0 объект > эндобдж 564 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / StructParents 67 / Тип / Страница >> эндобдж 565 0 объект > эндобдж 566 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Повернуть 0 / StructParents 68 / Тип / Страница >> эндобдж 567 0 объект > эндобдж 568 0 объект > эндобдж 569 0 объект > эндобдж 570 0 объект > эндобдж 571 0 объект > эндобдж 572 0 объект > / Граница [0 0 0] / Содержание (Законодательный обзор Оклахомы) / Rect [72.0 650,625 231,9766 669,375] / StructParent 1 / Подтип / Ссылка / Тип / Аннотация >> эндобдж 573 0 объект > / Граница [0 0 0] / Содержание () / Rect [72,0 615,9297 124,3037 628,8203] / StructParent 2 / Подтип / Ссылка / Тип / Аннотация >> эндобдж 574 0 объект > / Граница [0 0 0] / Содержание () / Rect [132,4302 615,9297 180,5981 628,8203] / StructParent 3 / Подтип / Ссылка / Тип / Аннотация >> эндобдж 575 0 объект > / Граница [0 0 0] / Содержание () / Rect [72,0 600,1797 378,7432 613,0703] / StructParent 4 / Подтип / Ссылка / Тип / Аннотация >> эндобдж 576 0 объект > / Граница [0 0 0] / Содержание / Rect [230.8867 234,4751 401,3164 246,1938] / StructParent 5 / Подтип / Ссылка / Тип / Аннотация >> эндобдж 577 0 объект > / Граница [0 0 0] / Содержание (Конституционное право) / Rect [137.2383 213.6431 268.7812 225.3618] / StructParent 6 / Подтип / Ссылка / Тип / Аннотация >> эндобдж 578 0 объект > / Граница [0 0 0] / Содержание (Закон о выборах) / Rect [273.2197 213.6431 378.1807 225.3618] / StructParent 7 / Подтип / Ссылка / Тип / Аннотация >> эндобдж 579 0 объект > / Граница [0 0 0] / Содержание (Первая поправка Commons) / Rect [418.2393 213,6431 495,0654 225,3618] / StructParent 8 / Подтип / Ссылка / Тип / Аннотация >> эндобдж 580 0 объект > / Граница [0 0 0] / Содержание (Первая поправка Commons) / Rect [72.0 197.1431 118.1182 208.8618] / StructParent 9 / Подтип / Ссылка / Тип / Аннотация >> эндобдж 581 0 объект > / Граница [0 0 0] / Содержание ([email protected]) / Rect [72,0 72,3516 140,1416 82,8984] / StructParent 10 / Подтип / Ссылка / Тип / Аннотация >> эндобдж 582 0 объект > ручей xXKoFW վ A`4c4h @ Kk5% GA | \ J = ԀAY73z * / xZ / Ǔʡu6: # | H [> V (i f> e7 S] +% mW: Y >> xsHm | PsCR`) Ch | EUK! «F # : Ƶ` (N @ # 46Fā, 9z == 8 p e =

Фейковые новости в социальных сетях: чья это ответственность?

У меня есть, и, согласно последним исследованиям Эрикссон, оказалось, что мы не одиноки.Последний отчет ConsumerLab «Социальные сети #OMG» показывает, что более половины пользователей социальных сетей говорят, что они читали фальшивые новости в социальных сетях, и более четверти понравились или поделились ими, даже не подозревая, что это фальшивка.

Когда различные субъекты намеренно или ошибочно распространяют дезинформацию, они потенциально подвергают опасности саму ткань наших обществ. Эта опасность, которая, пока мы говорим, довольно интенсивно обсуждается в США, заставляет меня задаться вопросом: что мы можем сделать, чтобы минимизировать опасности, которым подвергаются социальные сети?

————————————————- ————————————

Послушайте, как автор и ее соавтор, Андре Гуальда, обсуждают свои основные выводы в социальных сетях и фейковые новости в этом выпуске подкаста Ericsson News.

————————————————- ————————————

Можно ли доверять социальным сетям?

Для меня социальные сети стали лучшим способом получать новости. На Facebook я могу читать новости из любимых газет каждый день. В Твиттере, отслеживая ведущих европейских и шведских общественных деятелей, я могу прочитать их мнения о различных событиях до того, как их поймут журналисты. В LinkedIn я слежу за последними разработками в сфере бизнеса и технологий и слежу за обсуждениями в своих профессиональных сообществах.Я ценю социальные сети за то, что они дают мне возможность быть в курсе последних новостей, просто просматривая мои ленты новостей. В то же время для меня социальные сети стали местом, где я могу также дезинформироваться. И что еще хуже, я тоже был виноват в том, что делился новостями, которые, как я позже выяснил, были фальшивыми.

Слухи, фальшивые новости и другие проблемы с конфиденциальностью данных могли существовать всегда, так почему мы так много говорим об этом сейчас — и почему внезапно такое внимание в СМИ?

Объем недостоверной информации в социальных сетях вызывает беспокойство, и недавние события, безусловно, поставили социальные сети под сомнение.Причина для беспокойства неудивительна, учитывая, что многие потребители в значительной степени полагаются на социальные сети для получения новостей. В США, например, 67 процентов участников опроса говорят, что они получают свои новости из социальных сетей в целом, а 45 процентов говорят, что они получают их только из Facebook. Ситуация в Европе немного лучше, но все же вызывает беспокойство. В ЕС 13 процентов потребителей говорят, что они следят за европейской политикой через социальные сети, а в отношении внутренней политики эта цифра выросла до 16 процентов.В Швеции и Дании социальные сети служат основным источником информации для 30 процентов потребителей.

Тем не менее, несмотря на эти высокие цифры, есть свидетельства того, что потребители скептически относятся к информации в социальных сетях. Согласно нашему последнему отчету ConsumerLab, менее каждого пятого доверяет информации, которую они читают в социальных сетях.

Тролли, боты и нарушения конфиденциальности

Итак, для нашей же безопасности следует вообще отказаться от социальных сетей? Последние вирусные новости об утечках данных, а также о других проблемах, включая зависимость, кибер-издевательства, кражу личных данных, троллей и ботов и т. Д.безусловно, предложите уважительную причину.

Для меня довольно удивительно то, что, согласно отчету ConsumerLab, большинство из нас, кажется, осведомлено о проблемах социальных сетей (изображенных ниже на Рисунке 1), но мы не хотим отказываться от своих привычек. На самом деле нет никакой связи между осведомленностью о различных проблемах социальных сетей и временем, проведенным в социальных сетях.

Оказывается, многие из нас разделяют опасения, связанные с социальными сетями, но это не означает, что мы готовы отказаться от своих привычек. И действительно, я тоже не хочу отказываться от этой важной части моей профессиональной и общественной жизни.Вопрос в том, что мы можем сделать, чтобы улучшить ситуацию, если мы вряд ли откажемся от своего поведения в социальных сетях?

Рис. 1. Осведомленность потребителей о различных проблемах социальных сетей

Можем ли мы остановить распространение фейковых новостей?

Печатные СМИ, такие как газеты и журналы, строят отношения со своими читателями на основе репутации. Они устанавливают эту репутацию, тщательно проверяя информацию перед ее публикацией. Однако в социальных сетях нет редакторов, что позволяет бесконтрольно распространять любой контент.Так, может быть, не такая уж плохая идея иметь человека или ИИ, проверяющего контент платформы социальных сетей? Это был ключевой вывод из отчета ConsumerLab: две трети говорят, что службы социальных сетей должны нанимать сотрудников для ручной проверки контента на своих платформах, а 40% ожидают, что редакторы AI сделают это в будущем.

Компании социальных сетей начали осознавать потенциальные угрозы на своих платформах. Но, тем временем, что мы можем сделать, чтобы защититься от фейковых новостей?

Я считаю, что в этом контексте нельзя игнорировать роль самих потребителей.Как ответил один из наших респондентов: «Вы должны прочитать и разобраться в этом сами», а другой добавил, что «людей нужно учить, как правильно проводить исследования и находить истину, если они читали в Интернете что-то, что не имеет надежных источников». И они правы. Разве нам не следует более критически относиться к информации, которую мы находим в Интернете? Каждый из нас несет личную ответственность за то, чтобы быть редактором, вместо того, чтобы требовать от компаний социальных сетей выполнять эту роль и перепроверять потребляемую нами информацию.

Я думаю, что это может быть очень хорошей практикой для начала. Когда я, например, сталкиваюсь с новостями, которые кажутся мне подозрительными, я пытаюсь проверить, не сообщали ли эти новости и другие информационные агентства; я проверю данные и ссылки, которые они называют своими источниками; и вообще я стараюсь быть более критичным. Другие признаки, которые поднимают для меня красный флаг, — это новости без имени автора, новости, вызывающие эмоциональную реакцию и исходящие от ненадежных информационных агентств.

Итак, кто должен пресекать фальшивые новости?

Фейковые новости в социальных сетях — сложное явление, и, вероятно, к нему нужно подходить с разных сторон.Нельзя отрицать роль социальных сетей в контроле над распространением фейковых новостей на своих платформах. Но мы, пользователи социальных сетей, тоже должны сыграть свою роль. Например, научившись проверять информацию, которую мы читаем в социальных сетях. Личная ответственность может стать первым шагом к защите ткани нашего общества.

Что еще современные потребители говорят о фейковых новостях и социальных сетях? Узнайте из отчета ConsumerLab #OMG: социальные сети здесь, чтобы остаться

FAK / PYK2 способствует пути Wnt / β-катенина и канцерогенезу кишечника путем фосфорилирования GSK3β

[Примечание редакции: ответы автора на предыдущий раунд рецензирования приводятся ниже.]

Мы приложили все усилия, чтобы полностью отреагировать на критику в этой редакции; результаты наших дополнительных экспериментов подтверждают наш вывод. Наши ответы на конкретные комментарии рецензентов и изменения, внесенные во время пересмотра, подробно описаны ниже.

Рецензент №1:

1) Мутант KKKK следует использовать для подтверждения того, что ядерный β-катенин увеличивается независимо от активности FAK и PYK2.

Как было предложено, мы теперь включили результаты экспериментов с использованием мутанта KKKK15 / 27/32/36 RRRR (S4) и гибридного мутанта S4-убиквитина (Ub-S4, имитирующего убиквитинированную форму мутанта S4).Как показано на рисунке 4C (дорожки 7-10), в MEF R454 / PYK2 KD с недостаточной активностью FAK и PYK2 эктопическая экспрессия мутантного белка Ub-S4, но не S4, восстанавливает индуцированный Wnt β-катенин, подтверждая роль Убиквитинирование GSK3β при активации передачи сигналов Wnt.

2) Мутация KKKK мутанта Y216E должна подавлять активацию .

Как и предсказал автор обзора, наши новые данные (рис. 2A, дорожки 13 и 14) показали, что восстановление MEF GSK3β KO / GSK3α KD с помощью мутанта GSK3β ^{Y216E / S4} (миметик фосфорилирования Y216, лишенный убиквитинирования) ингибировал индуцированный Wnt β- накопление катенина.

Вместе наши новые результаты (рис. 4C, дорожки 7-10; и рис. 2A, дорожки 13 и 14) подтвердили, что это фосфорилирование убиквитинирование , которое опосредует стабилизацию β-катенина при стимуляции Wnt.

3) Фосфо-β-катенин ^{S33 / 37} следует измерять с мутантами GSK3 YF, YE и KKKK, чтобы подтвердить вывод о том, что pY216 не требуется для фосфорилирования β-катенина .

Как и предполагалось, мы теперь включили новые результаты, показывающие, что мутация GSK3β тирозина 216 (в фенилаланин или глутаминовую кислоту) или лизинов 15/27/32/36 на аргинины не влияла на активность GSK3β в отношении фосфорилирования β-катенина по серину S33 и 37 in vitro (рис. 1G, верхняя панель) и в клетках (рис. 1G, нижняя панель).

4) Механизм был бы намного лучше подтвержден, если бы авторы могли показать эффект GSK3β ^Y216 или убиквитинирования на способность β-TrCP взаимодействовать с p-β-catenin .

Мы провели новые эксперименты, чтобы решить эту проблему. Новые результаты (рис. 2B, правая панель) показали, что после стимуляции Wnt3, β-TrCP-связанный p-β-катенин ^{S33 / S37 / T41} был значительно больше в GSK3β KO / GSK3α KD MEF, восстановленных с помощью HA-GSK3β ^Y216F., чем в MEF, восстановленных с WT HA-GSK3β или HA-GSK3β ^Y216E, подразумевая, что статус фосфорилирования GSK3β ^Y216 влияет на набор фосфорилированного β-катенина ^{S33 / S37 / T41} _β-Tr.

5) Подавляет ли ингибитор PF опухоли, в которых мутирован первичный сайт фосфорилирования FAK в β-катенине?

Мы провели исследование ксенотрансплантата клеточной линии, чтобы ответить на этот важный вопрос, и ответ — да. Наши новые данные (рис. 4F) показали, что, хотя сверхэкспрессия β-катенина ^Y142E частично поставила под угрозу противоопухолевый эффект PF562271, лечение PF562271 значительно ингибировало in vivo рост клеток SW480, эктопически экспрессирующих Flag-β-катенин ^Y142E.Хотя этот результат дополнительно доказал важность FAK / PYK2-опосредованного фосфорилирования GSK3, он также предположил, что фосфорилирование β-катенина ^Y142E играет роль в FAK-таргетной терапии CRC.

Рецензент № 2:

[…] Хотя показанные эксперименты были убедительными, авторы поднимают два вопроса, которые в дальнейшем экспериментально не решались. Во-первых, двойной ингибитор FAK / PYK2 также блокировал GSK3α ^Y279 , предполагая функциональную избыточность, которая не была далее экспериментально выяснена .

Мы провели новые эксперименты, чтобы выяснить роль GSK3α ^Y279; (1) в активации пути Wnt / β-катенин и (2) в росте клеток SW480 in vivo. Наши новые результаты показали, что индуцированное Wnt накопление β-катенина ингибировалось в MEF GSK3β KO / GSK3α KD, восстановленных с помощью GSK3α ^Y279F, но не с помощью GSK3α ^Y279E (рисунок 2E, сравнивая дорожки 9-10 с 11-12), следовательно подтверждение роли фосфорилирования GSK3α ^Y279 в активации передачи сигналов Wnt.Наши новые данные также показали, что в клетках GSK3α / β KD SW480 восстановление клеток WT HA-GSK3α или HA-GSK3α ^Y279E, но не HA-GSK3α ^Y279F восстанавливает рост клеток в анализе ксенотрансплантата (рис. 2F), что указывает на функциональную важность фосфорилирования GSK3α ^Y279 в клетках CRC.

Во-вторых, авторы предполагают, но не тестируют, что FAK находился выше PYK2 in vivo, но не in vitro. Хотя авторы утверждают, что использование двойного ингибитора PYK2 / FAK может превосходить моноспецифические ингибиторы для блокирования возникающей резистентности у пациентов, актуальность их экспериментов in vitro для условий in vivo остается открытым вопросом и не рассматривается в представленных экспериментах.В отсутствие проверки in vivo сделанные выводы остаются довольно предварительными .

Благодарим рецензента за поднятие этого важного вопроса. Тот факт, что активность PYK2 в отношении фосфорилирования GSK3 не была нарушена в MEF с нокаутом FAK ^{R454 / R454} (фиг. 4B), действительно исключал FAK как прямую активность PYK2 in vitro. Мы также признали, что это не было точным утверждением, что «PYK2 и FAK действуют избыточно в кишечном туморогенезе». В пересмотренной рукописи мы предлагаем новый сценарий, чтобы объяснить, почему кишечно-специфическая делеция только FAK была достаточной для блокирования развития опухоли у мышей с мутацией APC .

Предыдущее исследование (Carothers et al., 2006) и наши новые данные (Рисунок 5C, правая панель) показали, что резкое повышение PYK2 произошло в опухолях у мышей APC ^{мин / +}, что указывает на то, что PYK2 активируется во время процесс онкогенеза кишечника. Индукция FAK, хотя и усиливается в опухолях, однако, запускается мутацией APC — инициирующим событием онкогенеза у мышей с мутантом APC , через активированный путь Wnt-мишень c-Myc (Ashton et al., 2010). Следовательно, индукция FAK мутацией APC должна происходить раньше, чем повышение уровня PYK2. Если это так, то это объясняет, почему ингибирование FAK кишечной делецией FAK было достаточным для подавления развития опухоли. Это также объясняет, почему обработка PF562271 ингибировала подъем PYK2 у мышей APC ^{мин / +} (рис. 5C, левая панель). Путем фосфорилирования GSK3 для продвижения пути Wnt повышенный уровень PYK2 в опухолях дополнительно усиливает Wnt-зависимый туморогенез — петлю положительной обратной связи, которая усиливает процесс развития опухоли (как предполагается в Carothers et al., 2006). В переработанную рукопись внесены соответствующие изменения в Обсуждение.

Независимо от точных механизмов, опосредующих регуляцию PYK2 in vivo во время онкогенеза кишечника, как FAK, так и PYK2 повышены в уже установленных опухолях толстой кишки у пациентов с CRC (Рисунок 6). Текущее исследование показывает, что эффективное ингибирование пути Wnt / β-катенин в клетках CRC, экспрессирующих FAK и PYK2, может быть достигнуто только путем одновременного воздействия на обе киназы, что обеспечивает твердое механистическое обоснование клинического использования двойного ингибитора FAK / PYK2 вместо FAK.

Фак из символов — Рисунки символами, картинки из символов, символы для вк

Faq PNG, векторы, PSD и пнг для бесплатной загрузки

Портрет из квадратиков и кружочков: russhatter — LiveJournal

Наше дело правое?

Личное мнение: надо ли учиться на программиста?

+Бремзен Андрей

Василий К. — Молодой дьявол songtekst en vertaling

Songteksten

Songtekstvertaling

Василий К. — Paroles et traduction des paroles de la chanson Молодой дьявол

Paroles

Traduction des paroles

Шкурки — Сообщество Империал — Страница 2

Французы рассказали о концепте PGO Cevennes Water Snake — ДРАЙВ

Низкомолекулярный активатор FAK способствует закрытию раны монослоя кишечного эпителия человека и заживлению язв у мышей.

Активация киназы фокальной адгезии сальмонеллой подавляет аутофагию через сигнальный путь Akt / mTOR и способствует выживанию бактерий в макрофагах

Рисунок 3

Эндотелиальный FAK необходим для стабильности сосудистой сети, выживания клеток и формирования ламеллиподов | Журнал клеточной биологии

Глобальное подавление фейковых новостей вызывает опасения по поводу цензуры | Социальные сети

Ложь, рисование линий и (глубокие) фейковые новости

Фейковые новости в социальных сетях: чья это ответственность?

Можно ли доверять социальным сетям?

Тролли, боты и нарушения конфиденциальности

Можем ли мы остановить распространение фейковых новостей?

FAK / PYK2 способствует пути Wnt / β-катенина и канцерогенезу кишечника путем фосфорилирования GSK3β

Добавить комментарий Отменить ответ