Гранат раскраска: Раскраска Гранат

Fuze | Оперативники | Tom Clancy’s Rainbow Six Осада

БИОГРАФИЯ

«Если умеешь адаптироваться, хаос тебе не враг».

Шухрат Кесикбаев родился в Самарканде, но незадолго до распада Советского Союза его семья иммигрировала в Россию. С ранних лет Кесикбаев проявлял интерес к науке. Оказавшись в армии, он изучал машиностроение и параллельно готовился стать машинистом. Кесикбаев применил полученные навыки в рамках многих проектов — в том числе при разработке оружия. О его умении собирать импровизированные устройства из ничего наслышаны все сослуживцы. Это качество делает Кесикбаева одним из ценнейших кадров команды Rainbow. Во время службы в 27-й мотострелковой бригаде он улучшил навыки стрельбы и расширил знания об оружии. Переход в Spetsnaz подтвержден, но все данные об операциях засекречены. Кесикбаев свободно говорит на узбекском, русском, украинском и английском.

ПСИХОЛОГИЧЕСКИЙ ПОРТРЕТ

«Сдержанный» — не та характеристика, которую следует дать Шухрату Кесикбаеву (Fuze). Как говорила моя бабушка, «Говоришь с ним — будто зубы ему вырываешь». Когда другие оперативники назвали его «загадочным», мне показалось, что они шутят. Не думаю, что Шухрат сложный человек. Он вежлив и радушен, но в то же время… скован. Пришлось потрудиться, чтобы разговорить его.[…]

Если не считать дискуссии с Тимуром Глазковым (Glaz), обычно Шухрат молчалив. Когда же он начинает говорить, все слушают предельно внимательно. В рапортах указано, что Кесикбаев постоянно участвует в проведении инструктажей, но во время операций может не проронить ни слова. Крайне важно, чтобы он поддерживал связь с командой во избежание нестыковок наподобие размолвки с Сю Мей Линь (Ying) касательно потерь среди гражданских. Мы же помним, что некоторые оперативники пришли из подразделений, чтящих принцип «никаких жертв».[…]

Мы должны были обсудить случаи халатного поведения, и я попросил его дать свое видение операции. Он сказал: «Моя задача — максимально эффективно сломить оборону», — и отказался признавать себя неосмотрительным. Очевидно, что его инженерные навыки крайне полезны для нас. Шухрат умен и расчетлив. Склонность к резким действиям компенсируется умением быстро ориентироваться. Я предложил ему поработать над развитием этой способности.[…]

Мне не удалось получить сведения о его брате, предположительно пропавшем без вести, так как досье засекречено. Зато я смог выудить у Кесикбаева некоторые детали личной жизни. Он был помолвлен в течение двух лет, но отменил свадьбу, так как решил, что «не пойдет по этому пути». Также Шухрат упомянул, что в детстве его родители поощряли увлечение русской культурой, и в итоге о наследии узбекского народа ему довелось узнать лишь в подростковом возрасте. Я попросил подробнее рассказать об этом жизненном опыте, но он ответил в своем стиле: «Было интересно».

— Доктор Харишва Панди, «Гарри», глава команды Rainbow

Сочный скетч с гранатом. Рисуем акварелью

Друзья, сегодня мы предлагаем Вам нарисовать сочный скетч с гранатом. 

Гранаты издавна считались необычным фруктом, гранатовое дерево называли древом жизни в Египте и верили, что гранаты, положенные в саркофаги фараонов, могут дать начало новой жизни. Прекрасная Клеопатра красила губы гранатовым соком, а в Китае гранат символизирует богатство, поэтому часто на свадьбу там дарят картины с изображением этих плодов. Нарисуем и себе парочку гранатов.

Шаг 1
Для начала нарисуем пару овалов, один побольше, второй поменьше. Расположим крупный овал ниже центра листа, чтобы хватило места на ветки и листья.

Шаг 2
Затем добавим на них ветки, листья и пипки!

Шаг 3
Смочим бумагу и на влажный лист запустим смеси оранжевых, красно-малиновых и желто-зеленых оттенков. Дождемся полного высыхания краски.

Шаг 4
Смочим фон и запустим желто-зеленые, оранжевые оттенки на листья и смеси коричнево-фиолетовых и сине-зеленых на фон. Позволим краске свободно растекаться по листу. Следим только, чтобы краска не затекала на гранаты.

Шаг 5
По сухой бумаге добавим красно-малиновых пятен в гранат, оставляя просвечивать предыдущую заливку. Смочим фон и добавим в него сине-зеленых, зеленых с фиолетовым оттенков.

Шаг 6
По сухой бумаге потрогаем кисточкой с зелеными оттенками листья так, чтобы сквозь пятна было выдно предыдущий слой краски.

Шаг 7
Слегка смочим фон и добавим в него акцентных темных касаний.

Шаг 8
Добавляем брызги на гранаты и на фон для придания экспрессивности и настроения нашему скетчу.

Шаг 9
На заключительной стадии можно добавить штриховки по форме граната и прожилок в листьях дерева.

  Рисуйте вместе с нами и делитесь своим творчеством с хештегом #art_markers в социальных сетях или публикуйте свои работы на нашем сайте artmarker. ru

Автор: художник и преподаватель Обухова Татьяна
Уроки акварели и скетчинга в творческом пространстве Андерсен @andersen.arts

сравниваем действия силовиков Беларуси и других стран — НАШ ДОМ

Пропагандисты и многие недалекие приверженцы колхозной диктатуры в Беларуси во время полемики частенько используют аргумент, что зверски избитые, покалеченные и убитые протестующие «виноваты сами, поскольку пошли против действующей власти, а власть себя защищала».

То, что власть удерживается незаконно, выборы августа 2020 года были сфальсифицированы, а бюллетени и документы избиркомов были в спешном порядке сожжены, для подобных индивидуумов – вопрос не существенный. При этом с пеной у рта нам стараются доказать, что «в ваших Европах и Америке бьют не меньше, не смотря на демократию».

Так ли это? «Наш Дом» попытался разобраться в этом вопросе, взяв за основу последние из прошедших протестов в других странах.

США

В начале января 2021 года, сразу после скандально прошедших президентских выборов в США, где в тяжелом противостоянии победил действующий президент Джо Байден, возле здания Капитолия в Вашингтоне собралась многотысячная толпа.

Справка «Нашего Дома»

Капитолий – то здание, где находится Конгресс Соединенных Штатов. Это одно из самых узнаваемых зданий страны, олицетворяющее мощь государства. По значимости для граждан и узнаваемости для людей из других стран Капитолий можно сравнить с такими зданиями и достопримечательностями, как Белый Дом (резиденция Президента США), статуя Свободы или надпись «Hollywood». Если провести аналогии с Беларусью и Россией, то в последней одинаковыми по значимости будут комплекс Кремля и здание Государственной Думы в Москве, а на нашей Родине – Дом правительства и Дворец Независимости в Минске.

Сторонники Трампа, не согласные с результатами выборов, окружили здание, некоторые вскарабкались на стены, проникли на балконы и ко входу. Проникшие в здание вели себя мирно. У многих были национальные флаги, у некоторых — селфи-палки. Они пересекли центральный зал по проходу, где совсем недавно проходили парламентарии.

 Манифестанты рассматривали внутреннее убранство, снимая все на видео и делая селфи. Малочисленная охрана им не мешала. Позже начались столкновения с полицией, в ходе которой правоохранители применили светошумовые гранаты и слезоточивый газ.

Было задержано чуть более 10 человек в то время, как у Капитолия собрались десятки тысяч. Об избитых полицией в американских и международных СМИ не сообщалось.

А теперь представьте, что протестующие Беларуси проникли бы в здание Дома правительства или Дворец Республики, пусть и вели бы себя внутри мирно? Уверены, что диктатор, от страха за собственную ничтожную жизнь, приказал бы, ничтоже сумняшеся, открыть по людям огонь из пулеметов. А его верные прихвостни в погонах, не задумываясь, такой приказ бы выполнили. Ведь руки у них уже по локоть в крови.

Европейский Союз

Вся Европа сейчас шумит толпами акций протеста против ограничительных мер, связанных с COVID-19.

• Так, например, во Франции демонстранты прошли по улицам Парижа, Марселя, Лиона, Монпелье, Нанта, Тулузы и других французских городов с лозунгами: «Свобода!» и «Нет вакцинным пропускам!».  Демонстрации, продолжающиеся во Франции с начала июля 2021 года, носят отнюдь не мирный характер. Известно о как минимум трех пострадавших полицейских. Были задержаны около 20 человек, из них не менее 10 – в Париже. Численность протестующих неумолимо растет, повторяя динамику развития протестов «желтых жилетов», которые начались в конце 2018 года с протестов против налогов на бензин и завышенной стоимости жизни. О пострадавших в результате действий французских силовиков при этом не сообщается.
• 1 августа 2021 года на улицы Берлина на акции протеста против ограничительных мер правительства вышли тысячи человек. С начала акций народ дал понять, что настроен решительно. Акция завершилась противостоянием людей с более чем двумя тысячами правоохранителей, в результате которого были задержаны свыше 500 демонстрантов. О жестокости полицейских и избиениях людей при этом снова нет никакой информации.
• В Италии протестовали около 80 тыс. человек. Недовольство людей вызвали ограничительные меры по всему полуострову от Турина до Неаполя. Демонстранты скандировали: «Свобода!» и «Долой диктатуру!».
• В греческих Афинах на площади перед парламентом собрались более 4000 жителей столицы.
  Не обошлось без потасовок между демонстрантами и полицией. В ответ на брошенные в сторону полицейских «народные коктейли» силовики применили слезоточивый газ.
• В Польше протестующие во время акции протеста у комендатуры полиции в Люблине применяли против правоохранителей коктейли Молотова, полицейские в ответ использовали водометы и слезоточивый газ. Народные протесты вспыхнули после смерти задержанного накануне мужчины. 
  «Несколько сотен человек протестовали в воскресенье перед комендатурой полиции в Люблине в связи со смертью молодого человека, последовавшей за задержанием полиции в пятницу. В сторону здания полетели яйца и камни, а также коктейли Молотова. Полиция применила слезоточивый газ и водометы. 40 человек были задержаны», — сообщила пресс-служба МВД Польши. Во время противостояния был поврежден вход в здание полицейского участка, выбиты стекла в окнах и дверях.
• 14 июля 2021 возле здания Верховной Рады Украины начались столкновения между бывшими силовиками и сотрудниками правоохранительных органов. На митинг вышли более тысячи силовиков на пенсии. Они потребовали от президента Украины Владимира Зеленского пересчета пенсионных выплат. Ветераны силовых структур прорвали металлические ограждения и попытались штурмовать здание парламента. Это произошло после отказа спикера Рады Дмитрия Разумкова выйти к ним на встречу. Протестующие скандировали фамилию главы парламента и требовали выйти на встречу с народом. Собравшихся сдерживали сотрудники полиции и Национальной гвардии Украины, затем началось противостояние, в ходе которого полицейские применили к участникам протеста слезоточивый газ.

Стоит заметить, что слезоточивый газ применяется в большинстве случаев противостояния между силовиками и протестующими в цивилизованных странах, как наиболее гуманное средство при разгоне демонстраций.  На случай аллергической реакции на такой газ у кого-либо, рядом всегда дежурит несколько медицинских бригад.

Кадры же беспредела карателей Беларуси облетели весь мир. От их преступных действий, предавших присягу народу Беларуси и навечно запятнавших офицерскую честь, страдали не только протестующие: под дурные руки попадали и журналисты, и волонтеры, и случайные прохожие, и даже сторонники диктатора.

В подобном с нашей страной схожа ее огромная восточная соседка – Россия. Там есть свой диктатор, более сумасшедший, но не такой агрессивный. Он берет непокорный русский народ измором, возведя коррупцию и полицейский беспредел в ранг национальной идеи. Это ведет Россию к медленному разложению общества. К счастью, русский медведь уже порыкивает и ворочается, готовясь проснуться и принести с собой ни разу не покоренный русский дух и долгожданную «оттепель».

А пока, увы, у соседей на востоке наблюдается примерно та же картина произвола и беспредела силовиков.

 Однако и там жестокость силовиков не идет ни в какое сравнение с нашей.

В России, задерживая людей, наносят пару ударов, после чего скручивают и волокут в автозак. Русское медиапространство оппозиционных (к сожалению, пока разрозненных) сил весьма обширно, но везде мы видим лишь картины задержаний, пусть и жестких, но никак не намеренных издевательств, ведущих к тяжелым увечьям.

Подводя итог, можно сказать, что протесты за рубежом, безусловно, подавляются силовиками и зачастую – с использованием силы и спецсредств. Однако, там это носит характер крайних мер и ответной реакции на такие радикальные проявления несогласия, как, например, коктейль Молотова.

Ударить мирного протестующего без причины для западного полицейского – тяжкое преступление, ответственность за которое настает неминуемо и быстро. Там полицейский – защитник, олицетворяющий добро, пусть и с кулаками.

В Беларуси, к сожалению, образ милиционера, а особенно – представителя какого-либо спецподразделения – это почти всегда образ узаконенного преступника, мучителя и разбойника с палкой или автоматом в руках, готового за кость от хозяина рвать на части того, кого прикажут.  Диктатор дал своим цепным псам карт-бланш на насилие над народом. Но очень скоро каждый, кто посмел поднять руку на тех, кого обязан был защищать, согласно Конституции и воинской присяге, будет судим по всей строгости законов Республики Беларусь.

Картина раскраска по номерам Сочный гранат BK-GX32215

Давно мечтаете украсить свой дом пейзажем или натюрмортом, нарисованным собственноручно, но полагаете, что без специального образования и навыков создать настоящую картину вряд ли возможно? Тогда рисование по номерам это ваш выбор 🙂

Для того чтобы раскрасить такую картину вам потребуется лишь немного терпения, несколько свободных вечеров и конечно же большое желание творить прекрасные вещи своими руками). Кстати, рисование картины по номерам помогает не только реализовать себя в творчестве, но заодно оказывает неплохой антистресс эффект – обязательно попробуйте взяться за раскрашивание после тяжелого трудового дня, и вы почувствуете, как быстро улетучиваются усталость и нервное напряжение.

Состав набора раскраски по номерам:

• Натянутый на деревянный подрамник прогрунтованный холст, на который нанесены контуры деталей будущей картины с напечатанными внутри них номерами красок;
• Акриловые краски в плотно закрытых и пронумерованных баночках;
• 3 кисточки разного размера;
• Фурнитура для крепления картины;
• Упаковка — полиэтиленовая пленка. Для надежности при транспортировке дополнительно пакуем картину в технический картон.

     

Наш ассортимент картин по номерам

В нашем интернет магазине вы найдете раскраски на любой вкус, начиная от нежных натюрмортов и букетов для кухни и заканчивая изображениями всевозможной техники и персонажей фильмов и сериалов. Если вы ищите товары какого-то конкретного производителя, то при помощи фильтра, расположенного в левой части экрана, вы можете выбрать картины по номерам Идейка, Brushme, Babylon и других известных брендов.

Как правильно рисовать по цифрам?

Все очень просто: открываем баночку, смачиваем кисточку водой, набираем немного краски и закрашиваем нужный фрагмент)

Нужно ли разводить краски водой? Если краски свежие, то вам будет достаточно набирать их слегка влажной кистью, а вот если они уже подсохли, то можно смело капнуть в баночку немного воды и хорошо их перемешать.

Раскрашивать можно как отдельными элементами – например, вазу или каждый цветок в букете, так и поочередно закрашивать все фрагменты определенного цвета.

Как купить картину по номерам?

Да, очень просто!)

• можно оформить заказ через корзину;
• позвонить по указанному в наших контактах телефону и продиктовать заказ менеджеру;
• написать нам в Вайбер;
• сделать заказ через нашу страничку в соцсетях (там, кстати, вас ждет много интересного – подарки, советы по рисованию, похвастушки готовыми работами и самые свежие новинки).

Картина по номерам Сочный гранат 40 х 50 см — BRM32215 130321173

Сочный гранат

Внимание! Цвета и четкость картины могут отличатся от изображения! 

Как провести время после работы и в выходной – вопрос, на самом деле, не из простых. Не всегда есть возможность (да и желание) куда-нибудь ехать или идти, а вырваться из серой рутины будней – очень даже хочется! Рисование по номерам – оригинальный и эффективный способ внести в свой досуг новые краски и эмоции, попробовать свои силы в необычной для себя сфере деятельности, и, что немаловажно, обязательно преуспеть!

Раскраски по номерам – пожалуй, самый демократичный вид творческого хобби, ведь для того чтобы рисовать нужно только иметь желание и немного терпения. Вам не потребуется никакой предварительной подготовки и никаких лишних затрат – обо всем уже позаботились разработчики этого удивительного продукта.

Набор для рисования состоит из таких компонентов:

• холст на деревянном подрамнике с нанесенной пронумерованной схемой картины;
• дополнительная схема картины на бумаге;
• набор всех необходимых красок (от 14 до 36 цветов), пронумерованных согласно схемы картины.
• 3-4 кисти разного размера из эластичного нейлона;
• крепление для будущей картины.

Весь этот набор упакован в коробку с пластиковой ручкой.

Рисуем поэтапно наш шедевр

Существует два наиболее популярных метода в рисовании по номерам.

Первый из них – идти от больших по площади сегментов картины к самым маленьким ( то есть начинать с того цвета, которого на картине больше всего и заканчивать тем, которого совсем немного).

Второй способ – просто идти сверху вниз, как в вышивании, постепенно заполняя схему указанными красками. Этот метод позволит Вам уже на первых этапах работы оценить цветовую гамму картины и предвкусить окончательный результат своих творческих усилий.

Так же существуют разные мнения касательно расположения холста: многие любители рисования по номерам предпочитают располагать холст горизонтально (как лист бумаги), многие считают, что интереснее работать с холстом на подставке (в вертикальном положении или под углом). Впрочем, Вы вправе сами решать, как рисовать, главное, чтобы место работы было хорошо освещено и удобно именно для Вас, а сам процесс – приносил удовольствие.

Вот как поэтапно выглядит процесс работы над картиной по номерам:

Маленькие секреты

1. Акриловые краски (а именно они используются чаще всего в рисовании по номерам) отлично ложатся, практически не имеют запаха и быстро сохнут. О последнем из этих качеств важно помнить, и всегда плотно закрывать баночки после использования.
* Кстати, если акрил использовать щедро – вы получите эффект рельефной картины «маслом», при том что сами акриловые краски сохраняются на холсте дольше и лучше чем масляные.
2. Нейлоновые кисти – очень удобны для работы с акрилом, долговечны и устойчивы к длительному контакту с водой. Все что необходимо – вовремя и тщательно промывать кисти и протирать сухой салфеткой после работы с тем или иным цветом.
3. Если в процессе рисования случилась ошибка, и Вы закрасили элемент рисунка не тем цветом – не огорчайтесь – подождите, пока краска высохнет, и просто нанесите слой нужного цвета сверху (у акриловых красок великолепная плотность покрытия).
4. И последнее – акрил легко смывается водой, но только не после засыхания. Если краска попала на руки или одежду – необходимо смыть ее сразу же.

Картина по номерам – прекрасный способ разнообразить свой досуг, украсить интерьер своего жилища или преподнести оригинальный подарок близкому человеку. А главное, это способ показать себе и всему миру: художник — не профессия – а состояние души!

Крашение гранатом | Натуральные красители Wild Colours

Гранат, известный в древности как символ любви, был популярным фруктом на протяжении тысячелетий. Красильщики используют кожуру для получения золотисто-желтого, зеленого, серого и черного цветов.

A. Биология граната
B. История граната как красителя
C. Крашение гранатом

A. Биология граната
Гранат — это листопадный колючий кустарник или небольшое деревце, принадлежащее к семейству Lythraceae.Этот привлекательный кустарник морозостойкий, засухоустойчивый и долгоживущий (до 200 лет). Гранат выращивают в теплых странах по всему миру.

Плод округлой формы до 12 см в диаметре с жесткой кожицей. Внутри много семян, каждое из которых окружено рубиново-красной мясистой мякотью. Мякоть может быть превращена в сок и сироп гренадин, а семена можно измельчить и превратить в специю, называемую анардана. Оставшаяся кожура не тратится впустую, а используется как краситель. Одно дерево дает около 1 кг сушеной корки в год.

Б. История крашения гранатом
P

гранат ткань, окрашенная гранатом окрашено гранатом и железом окрашено гранатом и индиго (вверху) или лаком (внизу)

омегранат — один из древнейших культивируемых фруктов, а его кожура тысячелетиями использовалась в качестве красителя ковровщицами. Он был символом любви в древности и даже фигурировал в древнеегипетской песне о любви.

Распространенное название «гранат» на латыни означает яблоко с семенами. Город Гранада в Испании был назван в честь плодов граната. В Риме он был известен как punica, так как он был завезен из пунической нации (ныне Тунис), и поэтому научное (общее) название — «Punica».

C. Крашение гранатом
Этот краситель с высоким содержанием танина (от 19 до 26%), поэтому он особенно хорошо работает с хлопком и другими растительными волокнами, но вы также можете использовать его для окрашивания шерсти и шелка.Вы получите желтый палевый при использовании граната без протравы и золотисто-желтого цвета с протравой. С добавлением железа вы получите мшистую зелень, серый и черный цвет. Вы можете перекрасить его индиго, чтобы получить красивый темно-зеленый цвет. Кожура граната популярна для контактного окрашивания (экопринт).

Незрелые плоды дают бледно-желтый цвет, а спелые плоды — золотисто-желтый. Большинство красильщиков покупают сухие измельченные кожуры граната, полученные из спелых фруктов. Однако, если у вас есть доступ к гранатовому дереву, вы можете использовать свежие фрукты.Если плоды маленькие, используйте целые измельченные плоды. Если у вас есть доступ к крупным фруктам с рынка, ешьте мякоть и используйте кожуру.

a) Желтые оттенки граната:
1. Замочите корки граната в горячей воде на ночь. Используйте такое же количество сушеной корки, что и волокна (например, если ваш кусок хлопчатобумажной ткани весит 80 граммов, используйте 80 граммов кожуры граната).

2. На следующий день тушить кожуру в течение часа.

3. Дать остыть, процедить кожуру и сохранить жидкость.

4. Добавьте влажное протравленное волокно в емкость для красителя. Осторожно тушите в течение часа.

5. Дайте волокну остыть в красильной ванне.

Примечание. Если вы красите хлопчатобумажную ткань и хотите получить пятнистый эффект, не нужно процеживать кожуру, просто добавьте ткань после того, как протушите кожуру, и тушите все еще час. Дайте ткани остыть в кастрюле и выньте ее. Дайте ему высохнуть снаружи, а затем вытряхните все куски.

b) Мшистая зелень, серый и черный оттенки граната:
Высокое содержание танинов в гранате означает, что он вступает в реакцию с железом, превращаясь в темно-зеленый цвет мха и даже в серый и черный.Просто помните, что слишком много железа повреждает шерсть, шелк и другие белковые волокна.

1. Протравите ткань и покрасьте ее в желтый цвет, следуя инструкциям выше.

2. Растворите крошечную щепотку железа в горячей воде, добавьте ее в емкость с горячей водой и хорошо перемешайте. Я держу старую кастрюлю и ложку только для использования с железом, чтобы оно не мешало другим красителям.

3. Надев перчатки, добавьте желтую влажную ткань и двигайте ею. Цвет быстро изменится с желтого на мшисто-зеленый.Выньте ткань из кастрюли, как только она достигнет желаемого цвета.

Для серого добавляйте щепотку железа за раз, пока не получите желаемый цвет. Для чернокожих добавьте примерно чайную ложку железа и оставьте ткань в кастрюле не менее чем на час.

c) Другие цвета из граната:
Для получения ярко-зеленого цвета сначала покрасьте ткань индиго от бледного до средне-синего, а затем протравите ее и перекрашите гранатом.

Чтобы получить персиковый цвет, покрасьте ткань в желтый цвет граната и перекрашите ее щепоткой экстракта лака.

Начало страницы

Натуральные красители — Гранаты — Народные волокна

Натуральные волокна, окрашенные гранатами, собранными в Остине, штат Техас

вверху: без протравы — чистый и землистый
внизу: протравка из квасцов делает цвета ярче, создавая желтые тона

Пропитанный историей и романтикой гранаты выращиваются издавна, они даже библейские.Мне повезло, что я живу в месте, где они плодоносно растут, полны полезных свойств и, в моем случае, это ботанический краситель. В целом гранат — красивый кустарник или небольшое деревце, более или менее колючий и чрезвычайно долгоживущий. Фрукты широко хвалят за сок, но мне нужны блестящие красящие свойства, отлично подходящие для окрашивания тканей. Красящие свойства проявляются как в кожуре, так и в цветках. У каждого граната жесткая кожистая кожура или кожура, в основном желтая, с более или менее наложенной светлым, темно-розовым или насыщенно-красным цветом.Внутренняя часть разделена перепончатыми стенками и белой губчатой ​​тканью (тряпкой) на отсеки, заполненные прозрачными мешочками, заполненными терпкой, ароматной, мясистой, сочной, красной, розовой или беловатой мякотью (технически — кожурой). В каждом мешочке одно белое или красное, угловатое, мягкое или твердое семя. Были использованы все части дерева: корневая кора, кожура, цветы, листья и, очевидно, плоды, все из которых имеют высокое содержание танинов, что делает его полезным для обработки кожи, получения красителей и в лечебных целях. Чернила можно сделать, погрузив листья в уксус.При окрашивании я использую целиком, используя весь фрукт и дробя или ломая поверхность до или после замачивания их в воде. Вы можете потратить время на то, чтобы удалить семена для еды, прежде чем использовать кожуру для отмирания. Размер плода зависит от сорта растения. Я собирал урожай с куста, который дает более мелкие плоды, поэтому я не удосужился удалить драгоценные семена перед тем, как использовать весь плод в качестве источника красителя.

Рецепт: (предварительная протрава волокон с квасцами для более ярких желтых тонов)

Гранаты!

Достаточно, чтобы заполнить горшок с красителем минимум на 3/4.
Сломайте поверхность фруктов, разрезая, топнув или взломав их молотком. Альтернативой их взламыванию является замачивание красящего вещества (граната) в воде на несколько дней (или недель), это смягчит кожуру, позволит ей расколоться, когда ванна будет доведена до кипения, и поможет получить цвет.

Пора готовить!

Залить краситель водой.
Доведите воду с красителем до кипения 30 минут (или дольше) и варите (не менее часа)
Дайте кастрюле остыть на ощупь, я предлагаю снять огонь и дать ей постоять на ночь, затем процедите гранаты из кастрюли,
отложите красящее вещество (мокрые корки), их можно сохранить и использовать повторно или компостировать.
Верните процеженную, богато окрашенную ванну для красителя (без мусора) в кастрюлю и повторно нагрейте

.

Пора раскрасить ткань!

Равномерно замочите волокна перед тем, как поместить их в ванну для красителя, поместите волокна, которые вы будете окрашивать, в горячую воду, прежде чем помещать их в ванну для красителя (это помогает раскрыть фолликул и добиться равномерного цвета на вашей ткани). После охлаждения на ощупь извлеките волокна из чистой горячей воды и поместите предварительно смоченные волокна в красильную ванну.

Нагрейте красильную ванну до медленного кипения в течение примерно 1 часа, используя ложку или палку, чтобы погрузить волокна и освободить пузырьки воздуха для достижения равномерного цвета, избегая переполнения емкости для красителя.
Уменьшите огонь и дайте волокнам остыть в красильной ванне, это даст более яркие результаты.
Большинство мастеров красок позволяют ванне остыть в течение ночи или даже нескольких дней … чем дольше, тем сильнее.
Проверьте цвет своей ткани и, если она достаточно темная, удалите волокна из красильной ванны, промойте холодной водой, пока вода не станет прозрачной
повесить сушиться. После высыхания ткани осторожно постирайте ее вручную или в машине с мягким моющим средством, например синтраполом.

Используйте свои волокна, чтобы создать что-нибудь красивое!

БЕСПЛАТНАЯ печать! Раскраска Гранат с забавным фактом!

• Facebook
• Pinterest
• Twitter

БЕСПЛАТНАЯ печать! Раскраска Гранат с забавным фактом!

Раскрасьте курсивными буквами, а затем раскрасьте эту милую страницу-раскраску граната.

Узнай что-нибудь новое об этом уникальном фрукте, раскрашивая! Знаете ли вы, что слово «гранат» означает «яблоко с множеством семян»?

Загрузите эту веселую раскраску «Гранат» бесплатно ниже!

Партнерские ссылки добавлены для вашего удобства. Если вам нужна дополнительная информация, ознакомьтесь с нашим полным раскрытием.

Связанный контент, который вам понравится

Если вам понравился этот пост, поделитесь, пожалуйста, в социальных сетях. Или прикрепите это, чтобы сохранить.

Что еще вы хотели бы видеть в The Art Kit? Дайте нам знать в разделе комментариев ниже.

Следуйте за нами на Facebook , Pinterest , Instagram и Twitter, и, пожалуйста, подпишитесь на нашу новостную рассылку , чтобы получать обновления и БЕСПЛАТНЫЕ печатные издания.

Посетите наш магазин для печати, чтобы увидеть еще больше забавных печатных форм!

Экономьте деньги на печати

Если вы хотите сэкономить на печати, советую вам попробовать HP Instant Ink.Я использую их в течение многих лет и сэкономил СТОЛЬКО денег! Это тоже просто — они знают, когда у вас заканчиваются чернила, и автоматически отправляют вам новые картриджи!

Вы можете попробовать их и получить один месяц бесплатно! Ознакомьтесь с HP Instant Ink здесь.

Тебе нравится эта раскраска «Гранат»?

Сообщите нам об этом в комментариях!

• Facebook
• Pinterest
• Twitter

10 вещей, которые я узнал: цвет граната | Текущий

1.

Родившийся Арутин Саядян, армянский поэт восемнадцатого века Саят-Нова, чье псевдоним означает «Царь песен», послужил источником вдохновения для создания «Цвет граната». Саят-Нова был ашугом, трубадуром, чьи стихи были положены на музыку, которую он играл на лютне. Поскольку он писал на трех языках, на которых говорят в Закавказье — армянском, азербайджанском и грузинском, — его издавна почитали как символ братства в регионе, о чем свидетельствует марка, посвященная 250-летию со дня его рождения в 1712 году.

2.

Режиссер Цвет граната, Сергей Параджанов, был армянином, но родился в Тбилиси, Грузия. Он считал себя духовным родственником Саят-Новы и считал, что его связи с мультикультурным Закавказьем сделали его идеальным художником, который перенес бы жизнь поэта на экран. С 1945 по 1952 год он учился в Институте кинематографии им. Герасимова (ВГИК) в Москве, где его преподавателями были Александр Довженко и Игорь Савченко.Среди его ранних работ, все из которых он счел бы забытыми и отреченными, — это The Top Guy (1959), кассовый хит, и Ukrankian Rhapsody (1961).

3.

Параджанов в титрах Иваново детство , военная драма Андрея Тарковского 1962 года, открывает ему глаза на возможности кино. Сюрреалистические фантазии и мечты в этом фильме порвали с жанровыми условностями и реализмом, которые были распространены в советском кино того времени.Два режиссера со временем стали близкими друзьями.

4.

Для The Color of Pomegranates, Параджанов отказался от традиционного биографического повествования и сосредоточился на визуальных и звуковых деталях. Режиссер заявил, что хотел «показать миру, в котором жил ashugh , источники, питавшие его поэзию. . . национальная архитектура, народное искусство, природа, быт и музыка будут играть большую роль в живописных решениях фильма.«Он придавал большое значение съемкам в исторических местах, которые были важны в жизни Саят-Новы, таких как монастырь Ахпат, где поэт в последние годы жил монахом.

5.

Хотя многие религиозные атрибуты, показанные в фильме, были редкими артефактами, Параджанов, чье имя в фильме является «автором», добавил свои личные штрихи. Он разработал несколько костюмов, в том числе зеленое платье, которое носил Ангел в конце фильма.

6.

Актер Софико Чиаурели играет разных персонажей в фильме, включая поэта и его любовь. Выбор одного и того же актера для обеих этих ролей был вдохновлен персидскими миниатюрами, на которых часто изображены пары с похожими лицами и чертами лица.

7.

Еще один намек на миниатюрную живопись: перспектива в кадрах часто намеренно «сглаживается». Эта техника напоминает персидские натюрморты и картины.

8.

Первоначально фильм должен был называться Sayat-Nova, , но Геворг Хайриан, председатель студии «Госкино» в Армении, решил, что с биографией объекта было допущено слишком много вольностей. Название было изменено сначала на Ashkharums , а затем на Nran guyne ( Цвет граната ). Именно под последним названием состоялась премьера фильма в Армении.

9.

Какими бы поэтичными ни были титры к фильму, ни в одном из них нет написания Саят-Новы.Когда Госкино стало ясно, что фильм не является биографическим фильмом, которого он ожидал, Параджанов был вынужден еще больше дистанцировать The Color of Pomegranates от работы и реальных деталей ashugh . Написание текста на экране было поручено известному армянскому писателю Гранту Матевосяну.

10.

Из-за недовольства неортодоксальным подходом фильма к жизни Саят-Новы, Госкино отказалось разрешить его показ за границей. Только в середине 1970-х годов, когда Параджанов был заключен в тюрьму по обвинению в «гомосексуализме и распространении порнографии» — обвинения, которые, по мнению многих, были политически мотивированы его связью с украинскими диссидентами и публичной критикой различных советских властей, — появился фильм. на Западе в бутлеге.Этот прорыв произошел после того, как киноведы, такие как Герберт Маршалл, поддержали работу и опротестовали заключение Параджанова в тюрьму.

«Белый» гранат без антоцианов (Punica granatum L.), вызванный вставкой в ​​кодирующую область гена лейкоантоцианидиндиоксигеназы (LDOX; ANS)

Abstract

Цвет является важным фактором, определяющим качество плодов граната и коммерческую ценность . Чтобы понять генетические факторы, контролирующие цвет граната, была проведена химическая, молекулярная и генетическая характеристика «белого» граната.Этому уникальному образцу не хватает типичного гранатового цвета, который антоцианы передают во всех тканях растения, включая цветы, плоды (кожицу и кожицу) и листья. Анализ устойчивой генной экспрессии показал, что ни одна из проанализированных «белых» тканей граната не способна синтезировать мРНК, соответствующую гену PgLDOX (лейкоантоцианидиндиоксигеназа, также называемая ANS , антоцианидинсинтаза), который является одним из центральных структурные гены пути биосинтеза антоцианов.Анализ ВЭЖХ показал, что ни одна из «белых» тканей граната не накапливает антоцианы, тогда как другие флавоноиды, соответствующие биохимическим реакциям выше LDOX, присутствовали. Молекулярный анализ «белого» граната выявил наличие вставки и SNP в кодирующей области PgLDOX . Было обнаружено, что SNP не изменяет аминокислотную последовательность и не полностью сцеплен с «белым» фенотипом у всех образцов граната из коллекции. С другой стороны, генотипирование образцов граната из коллекции и сегрегация популяций по «белому» фенотипу продемонстрировали его полную связь со вставкой, унаследованной как рецессивный моногенный признак.Взятые вместе, результаты показывают, что вставка в PgLDOX отвечает за «белый» фенотип, не содержащий антоцианов. Эти данные представляют собой первое прямое молекулярное, генетическое и химическое доказательство влияния естественной модификации гена LDOX на накопление цвета в плодоносящем древесном многолетнем лиственном дереве. Эта модификация может быть дополнительно использована для выяснения физиологической роли антоцианов в защите органов дерева от вредных условий окружающей среды, таких как температура и УФ-излучение.

Введение

Гранат ( Punica granatum L.) известен своими привлекательными цветами, с высокой вариабельностью цвета, зарегистрированной среди образцов граната из различных коллекций по всему миру, включая Иран [1], Китай [2], Турцию [3] ], Израиль [4], Туркменистан [5] и США [6]. Эта изменчивость проявляется в основном в кожуре плода, но также и в кожуре и цветках. Кожура плодов граната имеет широкий спектр цветов: от бело-желтого, зеленого, розового и красного до темно-фиолетового.Цвет плодов граната варьируется от белого до темно-красного, а цвет цветков варьируется от бело-желтого и оранжево-красного до темно-красного. Молодые листья имеют тенденцию к красноватому цвету и становятся зелеными, когда лист созревает, без заметной изменчивости среди образцов по этому признаку [7].

Антоцианы, принадлежащие к семейству флавоноидов, являются основными пигментами, отвечающими за цвет плодов граната. Шесть основных антоциановых соединений были идентифицированы в плодах граната, включая моно- и диглюкозиды цианидина (красный), пеларгонидин (оранжевый) и дельфинидин (фиолетовый) [8–11].Вариабельность окраски в разных тканях и среди разных образцов граната связана с различным содержанием антоциана и разным относительным количеством его производных [8]. Другие флавоноиды и полифенолы могут также вносить некоторые из желтоватых оттенков, наблюдаемых в плодах граната [12].

Антоцианы являются коммерчески важными молекулами из-за их полезных для здоровья свойств и привлекательного цвета. Была рассмотрена потенциальная польза для здоровья продуктов, богатых антоцианами растительного происхождения, с акцентом на роль антоцианов в профилактике рака [13], профилактике сердечно-сосудистых заболеваний [14], антимикробных и противовоспалительных эффектах [15–16], контроль ожирения, контроль диабета и улучшение зрительных функций и функций мозга [17–19].Антоцианы также влияют на цвет плода, что существенно влияет на рыночный успех. Кроме того, антоцианы играют важную роль в защите тканей растений от УФ-излучения [20–21] и фотоингибирования [22]. Также было показано, что эти пигменты удваивают срок хранения томатов, задерживая перезревание и снижая восприимчивость к серой гнили [23–24].

Генетический контроль биосинтеза антоцианов относительно хорошо изучен для многих видов растений, включая однолетние и древесные многолетники.К основным структурным генам, участвующим в биосинтезе антоцианов, относятся: фенилаланинаммиаклиаза (PAL), халконсинтаза (CHS), халкон-изомераза (CHI), флаванон-3-гидроксилаза (F3H), дигидрофлавонол-4-диредуктаза (DFR), лейкоциантоциантоцианоза (LDO). и UDP-глюкоза: флавоноид-3-O-глюкозилтрансфераза (UFGT) [25–26] (). Кроме того, регуляторные гены контролируют временную и пространственную экспрессию структурных генов. Основные регуляторные гены кодируют белки, содержащие домен R2R3-MYB, домен основной спираль-петля-спираль (bHLH) и повторы WD40.Комбинации белков R2R3-MYB, bHLH и WD40 и их взаимодействия определяют набор экспрессируемых генов [27–29].

Схематическое изображение пути биосинтеза флавоноидов, ведущего к продукции антоцианов и проантоцианидинов.

Сокращения названий ферментов следующие: PAL, фенилаланинаммиаклиаза; CHS, халкон-синтаза; CHI, халконизомераза; F3H, флаванон-3-гидроксилаза; F3’H, флавоноид-3′-гидроксилаза; F3’5’H, флавоноид-3 ‘, 5’-гидроксилаза; FLS, флавонолсинтаза; DFR, дигидрофлавонолредуктаза; LDOX, лейкоантоцианидиноксидаза; ANS, антоцианидинсинтаза; LAR, лейкоантоцианидин редуктаза; ANR, антоцианидин редуктаза; UFGT, UDP глюкоза: флавоноид 3-O-глюкозилтрансфераза.

Структурные и регуляторные гены, участвующие в пути биосинтеза антоцианов, высоко консервативны среди различных видов растений, включая гранат, в котором описаны три регуляторных гена: PgWD40 , PgAn1 (bHLH) и PgAn2 (MYB2). ) [30]. Активность регуляторного гена граната PgWD40 была продемонстрирована на мутанте арабидопсиса ttg1-9 и, как было показано, зависит от функции MYB. Кроме того, была обнаружена высокая корреляция между уровнями экспрессии трех регуляторных генов и двумя ключевыми биосинтетическими генами антоцианового пути: PgDFR и PgLDOX .Экспрессия генов PgWD40, и PgAn2 (MYB) также сильно коррелирует с накоплением цианидина (красного пигмента) в кожуре плодов граната [30].

Мутации в генах биосинтеза антоцианов, которые изменяют производство окраски, очень важны, поскольку они вносят вклад в наше понимание генетических и молекулярных механизмов, контролирующих накопление антоцианов в гранате. Кроме того, новые фенотипы могут использоваться как сорта с полезными признаками. Одной из таких мутаций является «белый» гранат, который характеризуется отсутствием типичного гранатового цвета в тканях растений, включая цветы, фрукты (кожица и кожица) и листья.

Белые гранаты были зарегистрированы в Китае [31], Индии [32] и Иране [33–34]. Однако термин «белый» в этих отчетах, по-видимому, относился в основном к не красным гранатам, и неясно, отражает ли «белый» частичное или полное отсутствие антоцианов в тканях растений или какие ткани были затронуты. Генетическая природа «белого» граната, как указано в настоящей рукописи, еще не определена. В этом исследовании молекулярные и генетические подходы были объединены с химическим анализом, чтобы охарактеризовать и определить природу «белого» образца граната.«Белый» фенотип изначально характеризовался отсутствием каких-либо признаков антоцианов в листьях, плодах (кожуре и кожуре) или цветках. Наш анализ показывает, что причиной «белого» фенотипа является мутация PgLDOX , структурного гена, участвующего в пути биосинтеза антоцианов в гранате.

Материалы и методы

Растительный материал

Гранат «Белый» образец P.G.254-265 и красный сорт. Замечательные (P.G.100-1) были из коллекции живых гранатовых деревьев в Исследовательском центре Нью-Яар, расположенном на севере Израиля (S1, рис.).Образцы из различных тканей собирали с весны (конец апреля) до осени (конец сентября) 2010 г. Первая стадия развития была собрана с неоплодотворенных гермафродитных цветков в конце апреля. Позже развивающиеся плоды собирали с интервалом в один месяц до конца сентября. Всего было собрано шесть различных стадий: цветок (стадия 1), молодые плоды (стадия 3 и 6), почти зрелые плоды (стадия 8), созревшие плоды (стадия 10) и перезрелые плоды в соответствии с коммерческой практикой (стадия 12). ).Были собраны от четырех до восьми цветков, плоды с каждого этапа отбора проб и молодые листья (до трех недель после распускания почек). Образцы цветов были взяты только с чашелистиков, а образцы плодов были разделены на кожицу и кожицу. Собранные ткани хранили при -80 ° C для дальнейшего анализа.

ВЭЖХ с обращенной фазой анализ антоцианов и других флавоноидов

Образцы тканей гомогенизировали в 80% метаноле с добавлением 2 ммоль L ^-1 NaF (1: 2, вес / объем), используя холодную ступку и пестик.Суспензию центрифугировали (10000 об / мин в течение 10 минут при 4 ° C, Sorvall Instruments RC5C, ротор № SS-34), и супернатант перед инъекцией фильтровали через фильтр из ПТФЭ (политетрафторэтилена) с диаметром пор 0,45 мкм.

Состав флавоноидов анализировали с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой согласно Borochov-Neori et al . [10] с системой ВЭЖХ LaChrom Merck Hitachi, состоящей из насоса L-7100, термостата колонок L-7350, смесителя-дегазатора L-7614 и ручного инжектора Rheodyne, соединенного с детектором диодной матрицы с функцией 3D (Multiwavelength Detector, Jasco MD- 2010 Plus), интерфейс (Jasco LC-Net II / ADC) и научное программное обеспечение (EZChrom Elite Client / Server версии 3.1.6 сборка 3.1.6.2433). Колонка LiChrospher 100 RP-18 (размер частиц 5 мкм в картридже LichroCART 250 x 4 мм, Merck Millipore) с защитной колонкой (LiChrospher 100 RP-18, размер частиц 5 мкм в картридже LichroCART 4 ​​x 4 мм) ) было использовано.

Бинарная подвижная фаза состояла из фосфорной кислоты (0,1% об. / Об., PH 2,4) (раствор A) и ацетонитрила (раствор B). Элюирование проводили по следующей градиентной схеме: 10% раствор Б на 1 мл мин ^-1 , 0–10 мин; 10–20% раствор Б по 1 мл мин. ^-1 , 10–15 мин; 20% раствор B на 1–0.6 мл мин. ^-1 (скорость потока меняется в этот период от 1 до 0,6 мл мин. ^-1 ), 15–16 мин, и 20% раствор B при 0,6 мл мин. ^-1 , 16–26 мин. . После элюирования антоцианином колонку промывали 80% -ным раствором B при 1 мл мин. ^-1 в течение 10 мин и уравновешивали 10% -ным раствором B при 1 мл мин. ^-1 в течение дополнительных 10 мин. Ацетонитрил был чистым для ВЭЖХ (LiChrosolv, Merck). Отфильтрованную через колонку воду дополнительно перегоняли с помощью Corning Megapure System MP-6A и пропускали через фильтр 0.Нейлоновая мембрана толщиной 20 °. Фосфорная кислота и NaF были аналитической чистоты.

Стандартная библиотека флавоноидов была сконструирована из дельфинидин-3,5-диглюкозида, цианидин-3,5-диглюкозида, пеларгонидин-3,5-диглюкозида (Apin Chemicals, Limited (Великобритания)), дельфинидин-3-глюкозида, цианидин-3-глюкозида, пеларгонидин-3-глюкозид (Polyphenols Laboratories AS), катехин, эпикатехин (Sigma-Aldrich Co., Реховот, Израиль), кемпферол-3-глюкозид и кверцетин-3-β-глюкозид (Fluka Analytical, Sigma-Aldrich Co., Реховот, Израиль). Идентификацию флавоноидов выполняли с помощью программного обеспечения на основе спектров поглощения УФ / видимого излучения и времени удерживания. Площадь пика также рассчитывалась с помощью программного обеспечения. Предел обнаружения (минимальная площадь пика) 15000 и 100000 был установлен для антоцианов и других флавоноидов соответственно. В условиях, использованных в данном исследовании, площади пиков хроматограммы линейно коррелировали с концентрациями соответствующих фенольных соединений.

Выделение нуклеиновой кислоты и синтез кДНК

Полную РНК экстрагировали из молодых листьев, цветов, кожуры плодов и кожуры граната, как описано Meisel et al .[35] для растений, содержащих большое количество полисахаридов и полифенольных соединений. Ткани по крайней мере трех цветов, плодов или листьев объединяли и затем экстрагировали. Каждый образец тотальной РНК инкубировали с 1 МБЕ-свободной от РНКазы ДНКазой I (Epicenter Biotechnologies, Мэдисон, Висконсин, США) в течение 30 минут при 37 ° C для удаления совместно экстрагированной геномной ДНК. Суммарную РНК количественно определяли спектрофотометрией (спектрофотометр ND-1000, NanoDrop Technologies, Уилмингтон, Делавэр, США), и качество оценивали по соотношению оптической плотности при 260 и 280 нм (A ₂₆₀ / A ₂₈₀ ) и A ₂₆₀ / А ₂₃₀ (1.От 8 до 2,2 и ≥1,8 соответственно, что указывает на хорошее качество), а также путем демонстрации полос интактной рРНК после электрофореза на агарозном геле. После обработки ДНКазой кДНК первой цепи синтезировали из 1,0 мкг общей РНК с использованием обратной транскриптазы Verso и олиго (dT) с помощью набора кДНК Verso (Thermo Scientific, Epson, UK) в соответствии с инструкциями производителя. Синтез первой цепи кДНК проводили в трех экземплярах для каждого образца (чтобы минимизировать вариации в уровнях матрицы РНК), а затем образцы объединяли.

Геномную ДНК экстрагировали из свежих молодых листьев методом гексадецилтриметиламмонийбромид-поливинилпирролидон (CTAB-PVP) [36]. Концентрации ДНК определяли с помощью электрофореза в агарозном геле и спектрофотометрически (NanoDrop).

Полуколичественная ОТ-ПЦР

Уровни экспрессии трех регуляторных генов и восьми структурных генов, которые, как предполагается, участвуют в биосинтезе антоцианов граната, анализировали с помощью полуколичественной ОТ-ПЦР. Гены были выделены из кожуры плодов граната на основании их гомологии с генами, которые, как известно, участвуют в антоциановых путях у других растений.Последовательности PgDFR , PgAn2 (MYB), PgAn1 (bHLH) и PgWD40 были взяты из Ben-Simhon et al . [30]. Последовательности PgPAL-4 , PgCHS-3 , PgCHI , PgF3H-2 , PgF3’H , PgF3’5’H и PgLDOX были получены недавно из транскриптомеграната PgLDOX . нашей группой [37].

Праймеры, специфичные для граната, используемые для амплификации генов биосинтеза антоцианов, и их соответствующие длины продуктов ПЦР перечислены в таблице S1.Условия ПЦР были следующими: 95 ° C в течение 4 минут, затем 28–31 цикл 95 ° C (30 с), 50–60 ° C (30 с) и 72 ° C (60 с), а также окончательное удлинение при 72 ° C в течение 7 минут и 4 ° C в течение 30 минут. Чтобы гарантировать, что амплификации были в пределах линейного диапазона, ПЦР выполняли с 27, 30, 33 и 40 циклами. Правильные условия ПЦР были подтверждены путем получения серийных разведений образцов кДНК и последующего определения плотности их полос на 1% агарозном геле.

Количественный анализ RT-PCR

qRT-PCR выполняли с использованием системы StepOne Plus (Applied Biosystems) и Fast SYBR Green Master Mix (Applied Biosystems).Реакции проводили в трех экземплярах с использованием 5 мкл Master Mix, 0,2 мкМ каждого праймера, 1 мкл разбавленной кДНК и воды, свободной от нуклеаз, до конечного объема 10 мкл. Праймеры, специфичные для граната, используемые для анализа qRT-PCR, перечислены в таблице S2. Условия термоциклирования были установлены как начальная стадия активации полимеразы в течение 20 секунд при 95 ° C, затем 40 циклов по 3 секунды при 95 ° C для денатурации матрицы и 30 секунд при 60 ° C для стадии отжига / удлинения. Флуоресценцию измеряли в конце каждого этапа отжига.После этого для каждой пары праймеров использовали протокол диссоциации с градиентом от 60 ° C до 95 ° C для проверки специфичности реакции qRT-PCR и отсутствия димера праймера. Необработанные данные были проанализированы с помощью программного обеспечения StepOne, версия 2.2.1. Экспрессию нормализовали к рибосомному белку S граната, названному PgRPSΙΙ , полученному из транскриптома граната [37]. PgRPSII был выбран для нормализации из-за его постоянного уровня транскрипта в различных тканях плода и разных образцах граната, при этом значения порога пересечения (Ct) меняются на <2.Образец со стадии развития 3 использовали в качестве калибратора с номинальным значением 1. Полосы ошибок, показанные в данных qRT-PCR, являются техническими повторениями, представляющими средние значения _ SE трех повторных реакций qRT-PCR.

Секвенирование

PgLDOX

Последовательность PgLDOX была получена из 454 анализа секвенирования РНК, экстрагированной из нескольких образцов граната, использованных для установления транскриптома граната [37], и из частичного секвенирования генома компанией Illumina, которое было выполнено на ДНК образца граната, производящего антоциан (неопубликованные данные).Продукты ПЦР очищали и очищали перед секвенированием с помощью набора Illustra ExoStar One-Step (GE Healthcare Life Sciences, Little Chalfont, UK). Реакции циклического секвенирования выполняли с помощью набора для циклического секвенирования BigDye (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) и анализировали с использованием капиллярного разделения на генетическом анализаторе ABI3130x (Applied Biosystems). Программа Mulatlin [38] была использована для сравнения последовательностей PgLDOX из разных образцов граната. Программа BLAST [39] использовалась для поиска гомологов PgLDOX в базе данных NCBI.Выравнивание множественных последовательностей выведенных аминокислотных последовательностей белков PgLDOX и LDOX из других растений было построено с использованием программного обеспечения Clustal Omega, а филогенетическое дерево было построено с использованием программного обеспечения Clustal W2-Phylogeny.

В PgLDOX были идентифицированы два полиморфных сайта: однонуклеотидный полиморфизм (SNP) C / T в положении 1008 ниже кодона инициации ATG и вставка. SNP был идентифицирован путем секвенирования гена PgLDOX в 20 различных образцах из коллекции граната, которые демонстрировали «белый» или цветной фенотип.Праймеры, специфичные для граната, используемые для амплификации и секвенирования сайта SNP, перечислены в таблице S2.

Установка была обнаружена в два этапа. (1) ПЦР-анализ с использованием праймеров, фланкирующих вставку (список праймеров в таблице S2). Это было сделано при следующих условиях: 95 ° C в течение 4 минут, затем 35 циклов 95 ° C (30 с), 55 ° C (30 с) и 72 ° C (60 с), и окончательное удлинение при 72 ° C. ° C в течение 7 минут и 4 ° C в течение 30 минут с использованием набора Taq RED Master Mix (Apex, Genesee Scientific, Сан-Диего, Калифорния, США).Эти условия ПЦР не могли амплифицировать вставку, и поэтому продукт ПЦР не был получен из образцов, содержащих последовательность вставки. (2) Амплификация вставки для определения ее последовательности. Мы использовали метод AFLP [40]. По существу, геномная ДНК «белых» и красных сортов была переварена с помощью MseI . Перевар ДНК лигировали с адаптером MseI, и продукты лигирования амплифицировали с помощью праймера на основе адаптера MseI и праймера PgLDOX-R7 из гена PgLDOX .Условия ПЦР были следующими: 95 ° C в течение 4 минут, затем 30 циклов 95 ° C (30 с), 55–60 ° C (30 с) и 72 ° C (60 с), и последнее продление. при 72 ° C в течение 10 минут и при 4 ° C в течение 30 минут. Повторную амплификацию продуктов ПЦР проводили с вложенными праймерами R5 и R2 (список праймеров в таблице S2). После третьей повторной амплификации на 1% агарозном геле разделяли фрагменты ДНК размером 150 и 250 пар оснований из «белого» и красного образцов соответственно. Полосы были выделены, очищены и секвенированы, как описано ранее.

Создание генетической популяции и ее генотипирование

Популяция F1 была создана путем скрещивания цветного образца ‘Nana1’ (PG149-50) в качестве родительской женщины с «белым» гранатом (PG164-65) в качестве мужчины. родитель. Произвольно отобранное потомство F1 самоопылялось с получением пяти популяций F2, всего 464 потомства. Одна популяция F2 из 91 растения была выбрана для генотипирования по двум маркерам, идентифицированным в PgLDOX : SNP и вставке.Генотипирование SNP выполняли методом плавления с высоким разрешением (HRM) [41–42] в системе Eco real-time PCR (Illumina). Высококачественная геномная ДНК была оценена с помощью NanoDrop (A ₂₆₀ / A ₂₈₀ и A ₂₆₀ / A ₂₃₀ ), и было определено такое же количество геномной ДНК (100 нг ° l ^-1 ). во всех образцах. Праймеры ПЦР для маркера PgLDOX HRM генерируют продукт длиной 116 п.н. и перечислены в таблице S2. Для программы HRM использовали Fast SYBR Green Master Mix (Applied Biosystems) в соответствии с инструкциями производителя.Неизвестные последовательности PgLDOX от потомства и известные последовательности PgLDOX от родителей сравнивали для определения генотипа каждого потомства.

Маркер вставки был генотипирован в популяции F2 с помощью ПЦР-анализа с использованием праймеров, фланкирующих вставку, в тех же условиях, которые указаны в разделе «Секвенирование PgLDOX ». Для амплификации частичной последовательности из вставки мы использовали праймер на основе 18 п.н., которые секвенировали методом AFLP (список праймеров в таблице S2).

Результаты

Фенотипические характеристики «белого» граната

Лепестки и чашелистики «белого» граната желто-белые (). Цвет кожуры на разных стадиях развития плода (стадии 3–10) варьируется от зеленого до желтоватого, а цвет кожуры на этих же стадиях развития белый (S1A Рис.). Полностью созревшие плоды (стадия 12) имеют беловатые кожуры и кожицу с коричневатым румянцем, типичным для легких повреждений от солнечных ожогов (). Крошечное красное пятно появляется на дужках и кожуре перезрелых плодов, оставленных на дереве зимой.Молодые листья «белого» граната зеленые, без следов красного цвета, в отличие от их ярко-красного цвета у большинства образцов граната (). Поскольку «белый» гранат содержит пигменты, такие как хлорофилл, незначительные количества каротиноидов и некоторые флавоноиды (данные не показаны), был выбран термин «белый», а не альбинос или бесцветный гранат.

ВЭЖХ-хроматограммы при 520 нм метанольных экстрактов различных тканей сорта cv. Чудесный (справа) и «белый» гранат (слева).

Идентичность пиков хроматограммы была основана на УФ / видимом спектре и времени удерживания: (1) дельфинидин-3,5-диглюкозид; (2) цианидин-3,5-диглюкозид; (3) пеларгонидин-3,5-диглюкозид; (4) дельфинидин-3-глюкозид; (5) цианидин-3-глюкозид; (6) пеларгонидин-3-глюкозид.

ВЭЖХ-анализ содержания антоцианов в «белом» гранате

Фенотипические характеристики «белого» граната убедительно свидетельствуют о том, что во всех его тканях антоцианы отсутствуют. Чтобы подтвердить это, был проведен анализ ВЭЖХ с использованием красного cv.Прекрасно подходит для борьбы с молодыми листьями, чашелистиками, дужками и кожицей молодых плодов (стадия 8) и полностью зрелых плодов (стадия 12).

Результаты и показывают, что красное cv. Чудесный содержал антоцианы в большинстве проанализированных тканей, тогда как «белый» гранат не содержал этих пигментов во всех проанализированных тканях. Моно- и дигликозидные производные цианидина (красный пигмент), дельфинидина (пурпурный пигмент) и пеларгонидина (оранжевый пигмент) были обнаружены в красном cv. Замечательно, их уровни варьировались в разных тканях.В листьях содержался только цианидин-3,5-диглюкозид. Чашелистики содержали в основном производные пеларгонидина и небольшое количество цианидина. Кожа полностью созревшего плода содержала производные цианидина и пеларгонидина, в то время как кожица полностью созревшего плода содержала цианидин, пеларгонидин, а также производные дельфинидина. Кроме того, антоцианы не наблюдались в кожуре и кожуре плодов на молодой зеленой стадии. В отличие от cv. Замечательно, что антоцианы не были обнаружены ни в одной из тканей, происходящих из «белого» образца граната.Этот результат подтверждает визуальные наблюдения и предполагает, что «белый» гранат не производит антоцианов ни в одной из исследованных тканей.

Таблица 1

Сравнение состава и количества антоцианов в различных тканях «белого» граната и красного сорта. Замечательный.

9063 P-3-глюкозид -глюкозид

Pelargonel -глюкозид

Ткань	Антоцианин	Площадь пика хроматограммы (площадь пика / мг ткани)
		cv. Чудесный	«белый» гранат
Молодые листья	Цианидин 3,5-диглюкозид	488,383	ND
Цветок (только чашелистики)	Цианидин-3,5-диглюкозид	85,825	ND
	Пеларгонидин 3,5-диглюкозид	903,953	ND
	Цианидин 3-3-глюкозид	53,639	53,639 D	55,552	ND
	Арилс (зрелая стадия)	Дельфинидин 3,5-диглюкозид	13,977	ND
Цианидин 3,5-диглюкозид		38,740	ND
Дельфинидин 3-глюкозид		7,521	7,521	-глюкозид	58,650	ND
Пеларгонидин 3-глюкозид		3,368	ND
Кожа (зрелая стадия)		Цианидин 3,5-диглюкозид	239 298	ND
	Пеларгонидин 3,5-диглюкозид	37,906	ND
	Цианидин 3-глюкозид	352,831	352,831	352,831	99,508	ND

Экспрессия ключевых биосинтетических и регуляторных генов антоцианового пути в «белом» гранате

Чтобы определить и понять молекулярный механизм, ответственный за нехватку антоциана в «белом» граната, проанализированы уровни экспрессии следующих генов, участвующих в биосинтезе антоцианов в гранате: структурных генов PgPAL-4 , PgCHS-3 , PgCHI , PgF3H-2 , 90 Pg103, PgF3’5’H , PgDFR и PgLDOX , и регуляторные гены PgAn2 (MYB), PgAn1 (bHLH) и PgWD40 .Полуколичественная ОТ-ПЦР была проведена на образцах кожи и кожуры плодов на разных стадиях развития и молодых листьев (). Выравнивание выведенной аминокислоты из генов граната и их соответствующих последовательностей в других гомологах генов растений представлено на S2 Рис.

Паттерны экспрессии исследуемых структурных и регуляторных генов биосинтеза антоцианов в различных тканях «белого» граната.

Представлены паттерны экспрессии структурных и регуляторных генов, которые, как предполагается, участвуют в биосинтезе антоцианов в гранате.Анализ проводился на кожуре и кожуре «белого» граната во время развития плодов [от цветков (стадия 1) до полностью созревших плодов (стадия 12)] и молодых листьев. W — молодые листья «белого» граната; R, молодые листья красного сорта. Замечательный. Полуколичественный анализ RT-PCR выполняли, как описано в разделе «Материалы и методы». Образцы нормализовали к 18S и 28S рибосомной РНК ( рРНК) в качестве контрольного гена для конститутивной экспрессии. Продукты ПЦР разделяли на 1% агарозном геле.

Все структурные и регуляторные гены, участвующие в биосинтезе антоцианов в гранате, за исключением PgLDOX , экспрессировались во всех исследованных тканях «белого» граната. Эти гены имеют характерный паттерн экспрессии с тенденцией к увеличению по мере созревания плодов. PgLDOX — единственный ген, который не экспрессируется ни в одной из тканей «белого» граната, то есть в цветке, кожуре и кожуре на разных стадиях развития плода и молодых листьях.В нашей предыдущей работе мы измерили экспрессию PgLDOX в двух красных сортах: cv. Замечательный и P.G.135-36, путем полуколичественного анализа. Высокая и положительная корреляция была обнаружена между уровнем экспрессии PgLDOX , а также между количеством цианидина (красный пигмент) и наблюдаемым фенотипом [30]. Чтобы проверить эти результаты, мы использовали количественный анализ RT-PCR для измерения экспрессии PgLDOX в кожуре красного сорта P.G. 135–36 и «Белый» гранат ().Экспрессия PgLDOX в красном сорте была характерна для того, что было обнаружено для PgLDOX , измеренное полуколичественным анализом. Кроме того, не было обнаружено экспрессии ни на одной из стадий развития кожи «белого» граната, как показал анализ qRT-PCR.

Экспрессия PgLDOX в красном и «белом» гранате на стадиях развития плода.

Количественный анализ ОТ-ПЦР был проведен на образцах красной (слева) и «белой» (справа) кожуры плодов граната на разных стадиях развития от цветка (стадия 1) до полностью созревших плодов (стадия 12).Относительное выражение выражается как кратность увеличения относительно стадии 3. Планки погрешностей представляют собой стандартную погрешность для трех повторных реакций. Внизу рисунка показаны различные стадии развития плода красного и «белого» граната.

Экспрессия фактора транскрипции PgAN2 (MYB) также не была обнаружена в молодых листьях «белого» граната. Однако в молодых листьях красного сорта он также не обнаружен. Замечательный. Таким образом, экспрессия PgAN2 (MYB) оказалась тканеспецифичной и не связана с «белым» фенотипом.

Сравнение содержания флавоноидов и проантоцианидинов в кожуре зрелых плодов «белого» граната и красного сорта. Замечательный

Указание на то, что «белый» фенотип может быть результатом нулевой экспрессии гена PgLDOX , предсказывает, что флавоноидные промежуточные соединения перед функцией LDOX будут накапливаться, тогда как компоненты, которые находятся ниже стадии LDOX, будут отсутствовать в «белом». «гранат (как отмечается в отношении антоцианов). Следуя этой логике, был проведен анализ ВЭЖХ для сравнения накопления различных флавоноидов в кожуре зрелых плодов (стадия 12) «белого» граната и красного сорта.Замечательный.

Хотя антоцианы не были обнаружены ни в одной из «белых» тканей граната (), флавоноиды, соответствующие вышестоящим стадиям функции LDOX, накапливались в кожуре плода этого образца. Таким образом, производные кемпферола (промежуточные продукты оранжевого пигмента пеларгонидина), производные кверцетина (промежуточные продукты цианидинового красного пигмента), производные катехина и катехина (промежуточные продукты проантоцианинового пигмента) накапливались в «белом» гранате в значительно больших количествах, чем в красном. резюме.Замечательный (). Эти данные убедительно свидетельствуют о том, что путь флавоноидов блокируется на стадии LDOX в «белом» гранате (см. Также).

Сравнение содержания предшественников флавоноидов и проантоцианидинов в кожуре зрелых плодов «белого» граната и красного сорта. Замечательный.

Сравнение геномных последовательностей

PgLDOX в «белых» и окрашенных образцах граната

Отсутствие экспрессии PgLDOX во всех «белых» тканях граната предполагает, что неспособность продуцировать антоцианин в тканях этого образца может быть следствием мутации, которая влияет на экспрессию PgLDOX .Эта мутация может происходить внутри самого гена, во фланкирующих областях гена или в других регуляторных или структурных генах, которые влияют на экспрессию PgLDOX . Чтобы изучить эти возможности, геномные последовательности PgLDOX в «белом» гранате сравнивали с таковыми в других цветных образцах граната из коллекции Newe Ya’ar.

Последовательность гена PgLDOX была определена комбинацией двух источников данных: во-первых, анализ секвенирования 454 РНК, экстрагированной из четырех разноцветных образцов граната, использованный для установления транскриптома граната [37], и второй, частичное секвенирование геномной ДНК. получено анализом Illumina (неопубликованные данные).Данные транскриптома предполагают наличие двух контигов LDOX: pom_rep_c1451 (инвентарный номер TSA {«type»: «entrez-нуклеотид», «attrs»: {«text»: «GBGR01001440», «term_id»: «679882542», «term_text «:» GBGR01001440 «}} GBGR01001440) и pom_rep_c28575 (инвентарный номер TSA {» type «:» entrez-nucleotide «,» attrs «: {» text «:» GBGR01028523 «,» term_id «:» 679822093 «,» term_text » : «GBGR01028523»}} GBGR01028523). Анализ RT-PCR с использованием специфических праймеров для каждого из контигов показал, что основным экспрессируемым контигом является pom_rep_c1451, поскольку контиг pom_rep_c28575 не транскрибируется в различных тканях и сортах граната и, вероятно, является некоторым псевдогеном (данные не показаны).Длина contig pom_rep_c1451 составляет 1,367 п.н. Кроме того, два неперекрывающихся контига: GenBank {«type»: «entrez-nucleotide», «attrs»: {«text»: «JI988744.1», «term_id»: «332426973», «term_text»: «JI988744 .1 «}} JI988744.1 и {» type «:» entrez-нуклеотид «,» attrs «: {» text «:» JI989504.1 «,» term_id «:» 332427733 «,» term_text «:» JI989504. 1 «}} JI989504.1, обозначенный как LDOX , также были обнаружены Ono et al . [43] в гранате. ОТ-ПЦР со специфическими праймерами для каждого из этих контигов выявила, что был транскрибирован только один контиг, который идентичен 3′-концевой части pom_rep_c1451 (данные не показаны).Поскольку имеются данные о частичной геномной последовательности граната, трудно оценить, сколько копий PgLDOX содержится в гранате. Однако, основываясь на данных транскриптома, анализе экспрессии ОТ-ПЦР и генетическом анализе, мы утверждаем, что PgLDOX (инвентарный номер TSA {«type»: «entrez-нуклеотид», «attrs»: {«text»: «GBGR01001440» , «term_id»: «679882542», «term_text»: «GBGR01001440»}} GBGR01001440) кодирует основной LDOX в гранате. В дополнение к данным транскриптома, геномные данные позволили добавить 1,223 п.н. в промоторной области и обнаружить единственный интрон между положениями нуклеотидов 505–506 в кодирующей области с длиной 94 п.н. ().Следовательно, общая геномная область гена PgLDOX , которая была секвенирована, составляет 2684 п.н.

Сравнение геномных последовательностей PgLDOX у «белых» и цветных образцов граната.

Схематическое изображение геномной структуры PgLDOX из «белого» и цветного граната. Белые прямоугольники обозначают экзоны, а серые прямоугольники обозначают транслируемые области. Вставка в PgLDOX из «белого» граната показана в виде треугольника и расположена между положениями 90–91 ниже кодона инициации ATG.SNP расположен на 1008 п.н. ниже ATG и не изменяет аминокислотную последовательность. [*] Представляет сайт короткой последовательности из вставки, которая была амплифицирована и секвенирована.

В полноразмерной последовательности была обнаружена открытая рамка считывания (ORF) размером 1071 п.н., что предсказывает белок из 357 аминокислотных остатков. Сравнение выведенной последовательности белка PgLDOX с последовательностями в базе данных GenBank выявило наибольшее сходство последовательностей с LDOX из Eucalyptus (85% идентичности аминокислот), винограда и цикламена Cyclamen graecum (идентичность аминокислот 83%), а также с фруктами. виды деревьев, принадлежащие к семейству розоцветных, включая персик, яблоко и клубнику (80–82% идентичности аминокислот).Более низкое сходство последовательностей (77–80% идентичности аминокислот) было обнаружено с LDOX, выделенным из видов семейств Solanaceae и Brassicaceae, включая LDOX из Arabidopsis thaliana (79%). Филогенетическое дерево, основанное на различных гомологах генов LDOX граната и других видов растений, представлено на рис. S3. Согласно этому дереву, PgLDOX сгруппировался вместе с LDOX из Eucalyptus с образованием отдельной клады белков LDOX.

Сравнение геномных последовательностей ДНК PgLDOX из «белого» и 20 цветных образцов граната показало, что этот ген хорошо консервативен среди разных образцов граната, за исключением одного SNP в ORF PgLDOX .Этот SNP расположен в позиции 1008 ниже инициирующего кодона ATG. Были обнаружены два аллеля для этого SNP: «белый» гранат содержал комбинацию T / T, а цветные образцы содержали C / C, за исключением одного образца, который был гетерозиготным по этому SNP (и). Однако также было обнаружено, что цветные братья и сестры «белого» граната имели те же аллели, что и «белые» братья и сестры (). Кроме того, этот SNP (от C до T) не влиял на выведенную последовательность белка. По этой причине предполагалось, что этот SNP не отвечает за «белый» фенотип.

Таблица 2

Характеристики окраски плодов и аллельные генотипы PgLDOX в различных образцах граната, выращенных в коллекции гранатов Newe Ya’ar.

Регистрационный номер	Общее название	Цвет кожуры плода	Цвет плодов	SNP	Вставка в оба аллеля PgLDOX
P.G.254-265	6/35 (3)	«Белый»	Белый	T / T	+
P.G.164-65	6/41 (3)	«Белый»	Белый	T / T	+
—	6/24 (3)	Розово-желтый	Белый	T / T	—
PG255-266	6/28 (3)	Темно-розово-желтый	Белый	T / T	—
PG170-71	6/32 (3)	Розово-желтый	Белый	T / T	—
P.G.100-1	Wonderful	Красный	Темно-красный	C / C	—
PG120-21	Rosh Hapered	Темно-розовый	Розовый	C / C	—
PG127-28	Черный	Черный	Розово-красный	C / C	—
PG128-29	Acco	Красный	Темно-красный	C / C	—
стр.G.218-229	Emek	Красный	Темно-красный	C / C	—
PG130-31	Shani-Yonay	Красный	Темно-красный	C / T	—
PG134-35	Kamel	Бордо	Красный	C / C	—
PG149-50	Nana1	Темно-розово-желтый	Светло-красный	C / C	—
П.G.160-61	Moti	Красно-желтый	Светло-розовый	C / C	—
PG201-212	ERS	Темно-розовый	Белый	C / C	—
PG204-215	C13	Розово-желтый	Светло-розовый	C / C	—
PG213-224	Mollar de Elche 17	Розово-желтый	Светло-розовый	C / C	—
P.G.202-213	XBS	Розово-желтый	Белый	C / C	—
PG167-68	«оранжевый»	Оранжево-желтый	Белый	C / C	—
PG219-230	SP1	Красный	Темно-красный	C / C	—
PG222-233	SP4	Красный	Красный	C / C	—

Дальнейшее секвенирование геномной ДНК PgLDOX показало, что «белый» гранат содержит вставку между положениями 90–91 ниже кодона инициации ATG ().Это было выведено из неспособности генерировать амплифицированный фрагмент из геномной ДНК «белого» граната с использованием набора праймеров, расположенных вдоль гена PgLDOX . Точное местоположение вставки было первоначально установлено путем сравнения фрагментов ПЦР, амплифицированных из красных образцов, с фрагментами, амплифицированными из «белых» образцов. Было обнаружено, что только наборы праймеров, фланкирующие сайт, расположенный на 90–91, не генерировали фрагмент ПЦР из геномной ДНК «белого» граната.С помощью ПЦР с набором праймеров, фланкирующим вставку в «белом» гранате; можно было различить разные образцы граната из коллекции. В то время как цветные образцы из коллекции и цветные братья и сестры «белого» граната давали полосу длиной 240 п.н., полосу из «белого» граната получено не было. Это произошло из-за того, что вставка сделала продукт слишком длинным для амплификации с помощью наших стандартных процедур. Следовательно, «белый» гранат содержит эту вставку в обоих аллелях PgLDOX , тогда как исследованные цветные образцы не имели этой вставки ни в одном из аллелей PgLDOX (и S4 на фиг.).

Все наши попытки усилить вставку и измерить размер вставки в «белом» гранате не увенчались успехом. Были использованы четыре вида наборов, которые содержат термостабильную ДНК-полимеразу Taq и позволяют амплифицировать длинные или сложные (высокое содержание ГХ) шаблоны: Expand Long Template PCR System (Roche), Color Perpetual OptiTaq DNA Polymerase (EURx), Q5 High-Fidelity. ДНК-полимераза ( BioLabs ) и ДНК-полимераза TaKaRa LA Taq ^® (Clontech). Ни один из наборов не позволял амплифицировать вставку.Неспособность амплифицировать вставку может быть связана с очень большим размером вставки или необычной последовательностью нуклеотидов во вставке, которая может содержать повторы и дупликации. Однако короткая последовательность (18 п.н.) из вставки была получена с использованием подхода AFLP со специфическим праймером из гена PgLDOX (S5 фиг.). Использование праймера на основе частичной последовательности, полученной анализом AFLP, в сочетании с праймером из гена PgLDOX дало фрагмент ДНК, который подтвердил присутствие вставки в «белом» гранате и в потомстве F2, которое показало «белый» фенотип.Все растения с «белым» фенотипом содержали эту вставку в обоих аллелях PgLDOX , тогда как потомство красного F2 имело по крайней мере один аллель PgLDOX без вставки (см. Более подробную информацию в следующем подразделе. ).

Создание популяции сегрегации F2 для «белого» фенотипа

Чтобы оценить, является ли вставка в PgLDOX сегрегацией для «белого» фенотипа, популяции от скрещивания цветного образца (‘Nana1’) и « белый «гранат».Популяция F1 содержала 79 потомков, ни одно из которых не показывало «белый» фенотип. Все потомство F1 имело окрашенные цветки, розово-красную кожицу и кожицу и красные молодые листья. Самоопыление случайно выбранного потомства из популяции F1 дало пять популяций F2 с общим количеством потомков 464. Популяция F2 разделилась по «белому» фенотипу, причем 27% потомства были «белыми» (126 из 464). Эти результаты ясно указывают на то, что «белая» мутация является рецессивной и имеет моногенный менделевский тип наследования (подтверждено критерием хи-квадрат, P ( ² ≤ 0 . 72) ).

Использование ПЦР с набором праймеров, фланкирующим вставку в «белом» фенотипе; можно было различить двух родителей населения. В то время как окрашенный образец «Nana1» давал полосу длиной 240 п.н., полосу от «белого» граната не удалось получить. Этот анализ был использован для генотипирования 91 потомства одной из популяций F2. Все «белые» потомки не давали полосы 240 п.н., это означает, что они содержали вставку в оба аллеля PgLDOX , тогда как все окрашенные потомки давали полосу 240 п.н., что означает, что у них есть по крайней мере один аллели PgLDOX без вставки (и таблица S3).

ПЦР-амплификация на отсутствие вставки в ген PgLDOX в потомстве F2.

Белые числа обозначают потомство с «белым» фенотипом, а красные числа обозначают потомство с окрашенным фенотипом. Схема расположения праймеров (F2 и R2) применительно к вставке находится внизу. Продукты ПЦР разделяли в 1% -ном агарозном геле.

Используя праймер на основе частичной последовательности от вставки, можно было получить положительные данные о наличии вставки.Действительно, когда популяция подвергалась скринингу с использованием комбинации праймеров, содержащей праймер на основе вставки и праймер из PgLDOX , можно было показать, что все «белые» потомки давали полосу 450 п.н., что означает, что они содержали вставку в оба аллеля PgLDOX . Кроме того, используя ту же комбинацию праймеров, также можно было различать гетерозиготы для вставки в окрашенное потомство F2, которое также давало полосу длиной 450 п.н. ().

Маркеры праймеров совместной доминантности, которые различают гетерозиготные и гомозиготные аллели для вставки в потомстве красного F2.

Белые числа обозначают потомство с «белым» фенотипом, а красные числа обозначают потомство с окрашенным фенотипом. Красная буква C / C указывает на гомозиготность маркера SNP (1008 п.н. ниже ATG, что также показано в таблице S3). Схема расположения праймеров F18 и R7, имеющих отношение к вставке, находится внизу (праймер F18 основан на 18 п.н., которые были секвенированы из вставки с использованием метода AFLP). Продукты ПЦР разделяли в 1% -ном агарозном геле.

Мы также использовали SNP, найденный в позиции 1008 относительно ATG PgLDOX , для скрининга популяции.Данные последовательности показали, что окрашенный образец «Nana1» гомозиготен по аллелю «С», а «белый» гранат гомозиготен по аллелю «Т». Как уже отмечалось, предполагалось, что этот SNP не отвечает за «белую» мутацию; однако он может быть весьма полезен в качестве генетического маркера родительского источника и для анализа сегрегации PgLDOX в выбранных популяциях, таких как описанные выше. Все потомство F1 показало гетерозиготность по SNP, содержащему аллели C / T; 24 потомства (26%) популяции F2 содержали аллели T / T, 45 потомков (50%) содержали аллели C / T, а 22 потомства (24%) содержали аллели C / C.Все «белое» потомство сегрегировалось с генотипом T / T (таблица S3). Данные ясно показывают, что «белый» фенотип разделяется с аллелями PgLDOX «белого» граната.

Обсуждение

Цвет играет важную роль в коммерческой ценности граната, поскольку потребители и промышленность нуждаются в фруктах с ярко-красной кожурой и кожурой. Кроме того, пигменты, такие как антоцианы, известны своим благотворным действием. В данном исследовании молекулярно-генетический контроль образования окраски был изучен на образце «белого» граната.Выяснение молекулярной причины «белого» цвета может пролить свет на контроль цвета в гранате и расширить нашу способность оценивать влияние различных составов производных антоцианов и других флавоноидов на рацион человека, защиту от таких факторов окружающей среды, как радиация и тепло. , и срок годности. Кроме того, мутации белого цветка могут использоваться для селекции декоративных сортов и в качестве видимых генетических маркеров при селекции.

Характеристика белых цветов и плодов у видов растений

Фенотипы белого цвета известны у различных видов не плодовых деревьев, таких как клубника [44–46], ложная земляника [47], цветки горечавки [48], георгины [ 49–50], цветы арктической горчицы [51], петунии [52] и Matthiola incana [53], среди других.У имитации клубники белый фенотип, как предполагается, связан с низкой экспрессией ANS / LDOX , но ген, ответственный за фенотип, так и не был окончательно определен. У других вышеупомянутых видов растений белый фенотип, как предполагалось, обусловлен фактором MYB (цветы клубники и горечавки), bHLH (георгины), TTG1-подобными (петуния и M . incana ) или CHS (георгины и георгины). Цветы арктической горчицы). Эти примеры показывают, что причины белого фенотипа могут быть самыми разными у разных видов растений.

Есть несколько исследований, описывающих белые мутанты у фруктовых деревьев, включая виноград и малайское яблоко. Было показано, что разница между красным и белым виноградом обусловлена ​​мутациями в двух факторах транскрипции MYB, которые специфически контролируют экспрессию UFGT [54–55]. Было высказано предположение, что в случае белого малайского яблока отсутствие экспрессии MYB является одной из причин отсутствия экспрессии UFGT и синтеза антоцианов во время развития плода [56]. В то время как как в винограде, так и в малайском яблоке было показано, что изменение в регуляторном гене (MYB-тип) вызывает белый фенотип, у граната «белый» фенотип вызван вставкой в ​​единственный структурный ген, PgLDOX .Недавно Zhao et al. [57] описали белый гранат и предположили, что белый фенотип связан с отсутствием экспрессии LDOX . Эти результаты согласуются с данными, представленными в этом исследовании, хотя Zhao et al. выводы были основаны только на данных экспрессии, и их работа проводилась только на ткани кожуры плода. В нашем исследовании использовались генетические и химические данные, чтобы определить ген PgLDOX как место и природу мутации.

Путь биосинтеза флавоноидов в «белом» гранате заблокирован на стадии LDOX

С помощью молекулярного, химического и генетического анализов это исследование показывает, что «белый» гранат мутирован в гене PgLDOX , который участвует в Биосинтез антоцианов в цветках, плодах и листьях граната.

Анализ экспрессии генов показал, что из 11 генов, которые, как предполагается, участвуют в биосинтезе антоцианов, структурный ген PgLDOX не экспрессируется ни в одной из «белых» тканей граната (фиг. И). С другой стороны, другие исследованные структурные и регуляторные гены были экспрессированы. LDOX кодирует фермент LDOX, который также называют антоцианидинсинтазой (ANS). LDOX катализирует превращение бесцветных лейкоантоцианидинов в окрашенные антоцианидины в результате реакции окисления, которая является одной из центральных стадий антоцианинового и проантоцианидинового пути [58–60].

Параллельно с молекулярным анализом был проведен анализ ВЭЖХ для определения состава и количества антоцианов и других метаболитов флавоноидного пути в молодых листьях, кожуре плодов, кожуре плодов и цветках. Наши результаты показали, что у «белого» граната способность вырабатывать антоцианы полностью отсутствует во всех исследованных тканях. Также было обнаружено, что кожица зрелых плодов «белого» граната накапливает значительно более высокие уровни кемпферола, кверцетина и катехинов и их производных, чем образцы красного граната ().Открытие того, что «белый» гранат может продуцировать флавоноиды, которые соответствуют биохимическим функциям выше, но не ниже PgLDOX , и не может продуцировать мРНК PgLDOX , решительно подтверждают предположение о том, что путь флавоноидов в «белом» гранате блокируется на стадии LDOX . В результате «белый» гранат не производит и не накапливает антоцианы и теряет цвет по сравнению с другими типичными образцами граната.

Вставка в ген

PgLDOX отвечает за «белый» фенотип

Сравнение последовательностей PgLDOX «белого» граната и разноцветных гранатов из коллекции выявило два изменения в кодирующей области этого гена: SNP («Т» в «белом» гранате и «С» в цветном гранате) и вставка в «белом» гранате.Изучая популяции от скрещивания цветного образца и «белого» граната, можно определить наследование «белого» фенотипа и связь между SNP и маркерами вставки и «белым» фенотипом. Была обнаружена полная связь между расщеплением «белого» фенотипа и этими двумя маркерами в гене PgLDOX . Все потомство с «белым» фенотипом (100%) содержало аллели T / T и содержало вставки в оба аллеля. Все окрашенное потомство (100%) содержало аллели C / C или C / T: гетерозиготное потомство (C / T) содержало вставку только в аллеле, происходящем от «белого» граната (аллель T), и никакой вставки не было. обнаружен в гомозиготном (C / C) потомстве (фиг. и).Генетическое исследование сегрегационной популяции F2 убедительно подтверждает предположение, что мутация, ответственная за «белый» фенотип, находится в гене PgLDOX .

Чтобы определить, являются ли SNP, вставка или и то, и другое ответственными за «белый» фенотип, были генотипированы дополнительные цветные образцы из нашей коллекции граната. Некоторые красные братья и сестры оказались гомозиготными по «белому» аллелю (T / T) в гене PgLDOX , но не содержали вставки (S4 фиг.).На основании этих результатов сделан вывод, что причиной «белого» фенотипа граната, не содержащего антоцианов, является мутация, состоящая из встраивания в ORF гена LDOX . Поскольку вставка расположена в кодирующей области в положении 90 от ATG, она нарушает транскрипцию нормального гена и, вероятно, генерирует нестабильный химерный аномальный транскрипт, который содержит только первые 90 п.н. из ATG PgLDOX . Это предположение подтверждается отсутствием какого-либо транскрипта PgLDOX в «белом» гранате, который содержит последовательность гена PgLDOX .Следовательно, в «белом» гранате не вырабатывается активный фермент LDOX. Кроме того, в «белом» гранате недостаток антоцианов был обнаружен во всех тестируемых частях растения, включая цветы, плоды и молодые листья. Этот фенотип подкрепляет предположение о том, что единственный ген LDOX отвечает за продукцию антоцианов в гранате и что PgLDOX кодирует основной LDOX в гранате.

Функция LDOX в растениях

Роль LDOX в пути биосинтеза антоцианов была охарактеризована у многих растений, включая Arabidopsis [61,62], яблоко [63], цветок Torenia hybrida [64 ], лук [65–66], виноград [67], китайская брусника [68] и клубника [69].В яблоках подавление LDOX у сорта яблони с красными листьями вызывало почти полную блокировку биосинтеза антоцианов. Это сопровождалось сдвигом профиля флавоноидов и родственных полифенолов [63]. Как и в яблоке, инактивация LDOX в гранате приводила к блокированию биосинтеза антоцианов и сдвигу в накоплении промежуточных флавоноидов.

Потенциальные роли LDOX в хранении плодов персика [70] и в выживании трансгенных яблонь [63] являются примерами потенциала LDOX в управлении важными сельскохозяйственными признаками.Однако, поскольку «белый» фенотип, в котором антоцианы отсутствуют во всех протестированных тканях, жизнеспособен и растет в открытых садах, можно сделать вывод, что растения граната могут выжить без антоцианов. Однако следует подчеркнуть, что хотя плод без антоцианов развивается нормально, он очень подвержен солнечным ожогам и потемнению.

Идентификация генетических компонентов, ответственных за наблюдаемую изменчивость окраски фруктовых деревьев, особенно сложна, главным образом из-за отсутствия адекватных генетических систем для анализа генетической изменчивости фруктовых деревьев.Гранат, среди прочего, мог бы стать такой системой, потому что у него относительно короткий период молоди и легко эффективно создавать гибриды [7]. В этом исследовании эти преимущества были объединены с генетическим подходом для выявления механизма, ответственного за «белый» фенотип без антоцианов.

Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.

---

Настройка вашего браузера на прием файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:

• В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки своего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
• Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались. Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
• Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
• Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
• Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie. Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

---

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.

---

Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файлах cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

Макароны с гранатом — Пироги и тако

Сегодня мы делаем макароны с гранатом.

Эти макароны с гранатом были восхитительны! Не говоря уже об этом потрясающем цвете.

Давайте поговорим на секунду о пищевых красителях и макаронах.

Излишне говорить, что для получения этого яркого насыщенного цвета в моих макаронах мне пришлось использовать довольно много пищевого красителя.

Какой пищевой краситель лучше всего использовать при приготовлении макарон?

При приготовлении макарон всегда следует использовать пищевой краситель на гелевой основе или пасту для пищевого красителя. Не используйте пищевые красители на водной основе, так как они испортят ваши макароны, потому что вода вступит в реакцию с яичным белком.

Пищевой краситель Wilton на гелевой основе — мой выбор.

Как сделать яркие цветные макароны?

Ответ простой: вам понадобится много пищевого красителя.

Имейте в виду, что накануне гелевый пищевой краситель может изменить консистенцию макарон. Я понимаю, что у моих макарон ножки были слишком большими, вероятно, из-за избытка влаги в жидком тесте, так как мне пришлось добавить много пищевого красителя, чтобы получить цвет, к которому я стремился.

Я использовал в основном бордовый, затем добавил несколько капель красного, немного розового и немного синего, чтобы сбалансировать розовый.

Подводя итог, будьте осторожны при использовании пищевого красителя во французском тесте для макарон. Обязательно используйте пищевой краситель на гелевой основе. И не добавляйте слишком много пищевого красителя, иначе ваше тесто может стать слишком влажным, и ваши макароны могут раздвинуть ноги.

Когда вы закончите тяжелую работу по приготовлению идеальных скорлуп для макарон, можно приступать к заполнению.

Просто нанесите кольцо сливочного крема на края скорлупы макарон и залейте его небольшим количеством гранатового джема.

Убедитесь, что варенье получилось очень густым. Приведенный ниже рецепт позволяет приготовить очень густое варенье, однако, в зависимости от того, насколько сочными были ваши гранаты или сколько жидкости вы добавили, ваше варенье может получиться более или менее жидким, чем мое.

При приготовлении повидла просто обратите внимание, не слишком ли оно жидкое или густое. Оно должно быть настолько густым, что вам придется вдавить семена в мелкоячеистое сито, чтобы выдавить из него варенье. На этом этапе, когда вы снимаете его с огня, оно не должно быть слишком жидким.Кроме того, когда он хранится в холодильнике, он еще больше загустеет.

И, как всегда, дайте макаронам созреть в холодильнике на ночь, прежде чем подавать их на стол, для получения оптимального вкуса и текстуры. Подавайте их после того, как они немного посидели из холодильника. Когда они выходят прямо из холодильника, иногда они могут быть немного твердыми.

Если вы новичок в приготовлении макарон, ознакомьтесь с моей публикацией о матче макарон, где я рассмотрю некоторые основные советы и приемы. В моем посте с малиновыми макаронами я рассказываю о миндальной муке, брендах, методах просеивания и т. Д.В своем посте Espresso Macarons я отвечаю на распространенные вопросы о приготовлении макарон. В своем посте Lemon Macarons я рассказываю о сроках хранения и хранении макарон. Проверь их! Кроме того, в Интернете есть множество других ресурсов, которые могут вам помочь.

Если вы хотите узнать больше рецептов макарон, нажмите здесь.

Спасибо, что прочитали мой блог! Хорошего дня!

Эта страница содержит партнерские ссылки. Это означает, что каждый раз, когда вы покупаете товар, который вы перешли на мой веб-сайт, я получаю небольшую сумму от Amazon.Это не требует дополнительных затрат, но помогает моему блогу! Спасибо!

Макароны с гранатом

Это гранатовые макароны с гранатовым джемом.

Состав

Ракушки для макарон

• 3
  яичных белков 100 граммов 3,5 унции
• 1/2
  стакана
  белого сахара-песка 100 граммов 3,5 унции
• 1
  стакана
  миндальной муки 96 граммов 3,4 унции
• 3/4
  стакана
  сахарной пудры 90 граммов 3.17 унция
• Пищевой краситель
  Я использовал немного бордового, красного, розового и немного синего.

Гранатовый джем

• 2
  стаканов
  зерен граната
• 1 / 4-1 / 2
  стакана
  гранатового сока
  или воды
• 3
  столовых ложек
  кленового сиропа
  или другого подсластителя
• 1
  столовая ложка кукурузного крахмала
  
• 1
  столовая ложка
  воды

Масло сливочное

• 2
  стаканов
  кондитерских просеянных сахаров
• 6
  столовых ложек
  сливочного несоленого размягченного
• 1
  чайная ложка
  ванильного экстракта
• 1
  столовая ложка
  сливок для взбивания

Инструкции

Ракушки для макарон

1. Перед тем, как начать, приготовьте все ингредиенты.Подготовьте большой кондитерский мешок с большим круглым наконечником.

2. Застелите два противня пергаментной бумагой или силиконовым ковриком.

3. Под пергаментом я положил макет с кругами размером около 1 1/2 дюйма каждый. Вот такой большой я люблю трубить свои макароны.

4. Отмерьте все ингредиенты.

5. Просейте вместе сахарную пудру и миндальную муку. Отложите в сторону.

6. Теперь можно, наконец, начать.

7. Положите яичные белки и сахарный песок в жаростойкую миску или пароварку. Над кастрюлей с кипящей водой взбейте белки и сахар до образования пены и полного растворения сахара. Это займет пару минут. Вы можете проверить смесь, прикоснувшись к смеси пальцами, и если вы почувствуете какие-либо сахарные гранулы, просто продолжайте взбивать смесь на водяной бане.

8. Убедитесь, что дно чаши не касается кипящей воды.

9. Перелейте смесь в чашу миксера.(При этом я использую миску KitchenAid, потому что это облегчает задачу)

10. С помощью венчика взбивайте смесь на высокой скорости в течение нескольких минут, пока не сформируются твердые пики.

11. Лучший способ проверить это — следить за белыми. Когда они станут глянцевыми, и вы начнете видеть полосы, образованные венчиком, возможно, пора остановиться.

12. На этом этапе не стоит перебивать смесь, потому что не нужно добавлять в нее слишком много воздуха.Просто взбивайте до образования жестких пиков.

13. Насыпьте сахарную пудру и миндальную муку в жесткие белки.

14. Начните аккуратно складывать лопаткой букву J. На этом этапе добавьте пищевой краситель, если хотите.

15. Пора перестать сворачиваться, когда тесто станет глянцевым, густым и текучим. Есть несколько способов проверить это, и вам, возможно, придется иметь пару неудачных пакетов, прежде чем вы сделаете это правильно.

16. Сначала я беру тесто с помощью лопатки и пытаюсь нарисовать цифру 8 с помощью теста, который стекает с лопатки. Если вы можете сформировать несколько восьмерок, не разбивая тесто, это значит, что оно может быть готово.

17. Затем я беру чайную ложку жидкого теста и ложкой на пергаментную бумагу или силиконовый коврик.

18. Если тесто остается жестким и немного не растекается, я начинаю складывать еще немного, примерно в 3 раза.

19. Проверить еще раз.

20. Как только жидкое тесто немного растеклось и стало глянцевым на пергаментной бумаге, я переложил смесь в кондитерский мешок.

21. Вы также не хотите, чтобы ваше тесто было слишком жидким. Так что будьте осторожны, не перемешайте слишком много. Всегда лучше перемешать и протестировать несколько раз, пока не будет достигнута должная консистенция.

22. На мой взгляд, это самая важная часть приготовления макарон.

23. После того, как вы накроете как можно больше кругов диаметром 1 1/2 дюйма, ударьте лотками по стойке по несколько раз каждый. Это освободит пузырьки воздуха из теста и предотвратит растрескивание скорлупы макарон.

24. Дайте противням немного постоять, чтобы скорлупа немного подсохла. Обычно я оставляю около 20-40 минут, в зависимости от того, насколько влажный день. Вы узнаете, что они готовы, когда вы осторожно прикоснетесь к поверхности макарон, и она станет сухой.

25. Разогрейте духовку до 325F.

26. Выпекайте по одному противню за раз.

27. Выпекать 4 минуты, перевернуть противень.

28. Выпекайте еще 4 минуты и переверните противень.

29. Продолжайте выпекать противни в общей сложности по 16-20 минут каждый.

30. После запекания макароны будут иметь более насыщенный цвет и форму ножек.

31. Достаньте из духовки и запекайте на другом противне.

32. Дайте макаронам остыть, прежде чем приступать к заполнению.

Гранатовый джем

1. Добавьте семена, сок, кленовый сироп в небольшую кастрюлю. Довести до кипения на среднем огне. Постоянно помешивая, убавьте огонь и дайте смеси приготовиться.

2. После того, как вы дадите смеси покипеть при перемешивании в течение 8 минут, вы можете смешать кукурузный крахмал с водой в небольшой миске, а когда вода и кукурузный крахмал смешаны, вы можете добавить это в джем.

3. Дать снова закипеть, варить пару минут до загустения. Выключите тепло.

4. Вылейте смесь через мелкое сито. Используйте лопатку, чтобы продавить смесь, по ходу соскребайте дно сита.

5. Положите джем в холодильник, пока он полностью не остынет, и вы готовы его использовать.

Масло сливочное

1. Сливочное масло на средней скорости в чаше миксера около 1 минуты.При выключенном миксере всыпать всю сахарную пудру.

2. На низкой скорости взбить сахар и масло вместе. Когда они смешаются, увеличьте скорость до средней и взбивайте 1-2 минуты, пока они не станут очень пушистыми. Добавить ваниль и сливки, взбивать еще 30-45 секунд.

3. ХРАНЕНИЕ: Храните сливочный крем в холодильнике до 1 недели.

Как собрать

1. Нанесите кружок сливочного крема по краям макарон так, чтобы в середине получилось небольшое отверстие.Заполните маленькую дырочку небольшим количеством гранатового джема. Не переполняйте его. Сверху кладем еще одну скорлупу.

Хранилище

1. Эти макароны с гранатом лучше всего хранятся в холодильнике до 4-7 дней.

Пищевая ценность

Макароны с гранатом

Сумма на порцию

калорий 80

* Процент дневной нормы основан на диете в 2000 калорий.